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HAUSP表达水平对胶质瘤细胞增殖和凋亡的影响
目的 探讨调控疱疹病毒相关泛素特异性蛋白酶(HAUSP)对胶质瘤细胞增殖和凋亡的影响.方法 构建HAUSP过表达及低表达质粒,转染胶质瘤 U87、U251细胞,上调或下调胶质瘤细胞中 HAUSP表达水平.荧光定量PCR、Western blot检测胶质瘤细胞中HAUSP mRNA和蛋白表达水平;利用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞增殖水平;流式细胞术检测细胞凋亡变化.同时检测各组细胞NANOG mRNA 和蛋白表达情况.结果 成功构建稳定HAUSP过表达和低表达U87、U251细胞株;与空白对照组相比,HAUSP过表达组细胞中,HAUSP的mRNA、蛋白水平均明显增加,NANOG mRNA水平无明显变化,但NANOG蛋白水平增加,同时细胞增殖能力增强,细胞凋亡水平降低;与空白对照组相比,HAUSP干扰组细胞中,HAUSP的mRNA、蛋白水平表达均降低,NANOG mRNA水平无明显变化,但NANOG蛋白水平降低,同时细胞增殖能力减弱,细胞凋亡水平增加.结论 HAUSP过表达可促进胶质瘤细胞的增殖,这一过程中伴随着NANOG蛋白水平的增高.因此,HAUSP可能通过维持NANOG去泛素化状态而维持胶质瘤细胞的增殖活性.
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HAUSP与NANOG在胶质瘤中的表达及意义
目的 探讨HAUSP、NANOG在胶质瘤细胞中的定位及在人脑胶质瘤组织中的表达,了解二者在胶质瘤进展中的作用. 方法 取安徽医科大学附属省立医院神经外科自2010年1月至2010年11月间手术切除的胶质瘤标本72例,其中WHOⅡ级19例、WHOⅢ级25例、WHOⅣ级28例,采用免疫组织化学染色检测HAUSP、NANOG蛋白在胶质瘤中的表达;常规培养U87胶质瘤细胞株,双重免疫荧光细胞化学染色检测U87细胞HAUSP/NANOG的亚细胞定位.结果 不同级别胶质瘤中HAUSP蛋白阳性细胞率比较差异有统计学意义(F=15.926,P=0.000),且胶质瘤的病理级别越高,HAUSP蛋白阳性细胞率越高,差异有统计学意义(P＜0.05)；胶质瘤的病理级别和HAUSP蛋白表达水平呈正相关关系(r=0.726,P=0.000)；不同级别胶质瘤中NANOG蛋白阳性细胞率比较差异有统计学意义(F=14.768,P=-0.000),且胶质瘤的病理级别越高,NANOG蛋白阳性细胞率越高,差异有统计学意义(P＜0.05)；胶质瘤的病理级别和NANOG蛋白表达水平呈正相关关系(r=0.685,P=0.000)；胶质瘤细胞U87中,两者均有表达,且两者共定位于细胞核. 结论 HAUSP与NANOG两者在胶质瘤发病中起重要作用,且与肿瘤恶性度相关;NANOG作为维持胶质瘤细胞未分化或低分化状态的标记物,HAUSP的去泛素化作用可能对于NANOG维持胶质瘤细胞的未分化状态有重要作用.
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HAUSP在结直肠癌中的表达及意义
目的 研究疱疹病毒相关性泛素特异性蛋白酶(HAUSP)在结直肠癌中的表达变化以及该变化对患者的临床意义.方法 采用实时荧光定量PCR技术检测72例结直肠腺瘤与92例配对的结直肠癌组织及癌旁组织中HAUSP的表达变化.分析HAUSP表达变化与结直肠癌的临床病理学特征的关系,并通过Kaplan-Meier生存分析进一步评估该表达变化与患者预后的关系.结果 HAUSP在结直肠正常黏膜、腺瘤及癌中进行性下降.HAUSP表达下调的患者肿瘤分期更晚(P=0.020)、浸润深度更深(P=0.026)、更易出现淋巴结转移(P=0.034),且总生存率(P=0.006)及无病生存率(P=0.014)均更差.结论 HAUSP可能参与了结直肠癌的发生、发展,并可能成为判断患者预后的指标.
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疱疹病毒相关性泛素特异蛋白酶(HAUSP)单克隆抗体的制备及鉴定
目的 制备针对HAUSP蛋白的单克隆抗体并进行鉴定.方法 扩增人HAUSP基因片段,构建含HAUSP编码序列的原核表达载体,在大肠杆菌Rosetta中表达融合蛋白.应用Ni-NTA agarose对重组蛋白进行了纯化,利用纯化的融合蛋白免疫小鼠,制备了可特异性识别HAUSP的单克隆抗体.通过间接ELISA法鉴定了抗体的效价,Western blotting和Immunoprecipitation(IP)实验检测抗体的特异性.结果 HAUSP基因长539 bp,表达融合蛋白在其2～180位氨基酸,相对分子质量44 800,纯化后蛋白纯度≥85％,制备的HAUSP单克隆抗体可识别Jurkat和Hela细胞内的HAUSP蛋白,并且具有良好的特异性.结论 本研究制备了效价高、特异性好的HAUSP的单克隆抗体,为进一步揭示HAUSP在肿瘤发生中的功能提供了有效工具.
