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人前列腺特异抗原mRNA文献资料
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人前列腺特异性抗原mRNA实时荧光PCR定量标准品的构建
目的构建实时荧光定量PCR(FQ-PCR)的标准品以定量检测人前列腺特异性抗原(PSA)mRNA的表达.方法以Trizol裂解抽提法提取LNCaP细胞的总RNA.以RT-PCR法制备PSAcDNA目的片段并进行扩增;以A-T载体克隆法制备重组质粒,并转化E.coli DH5α菌提取重组质粒,联合用氨苄青霉素筛选法和α筛选法、EcoRⅠ限制性酶切和序列分析法鉴定特异性重组质粒.用聚乙二醇沉淀法提纯质粒并检测λ260 nm吸光度,确定原液的重组质粒的拷贝浓度并以此制备FQ-PCR梯度标准品.结果 PSAcDNA目的片段成功制备并获得稳定的重组质粒,保持了目的片段的特异性和序列的完整性.结论成功构建了实时荧光定量PCR标准品.
关键词： 聚合酶链反应 人前列腺特异抗原mRNA 标准品 构建
