首页 > 文献资料
-
脊髓小脑型共济失调Ⅲ型ataxin-3相互作用蛋白的筛选
目的:利用酵母双杂交系统3筛选与ataxin-3相互作用的蛋白质,探讨ataxin-3的功能和脊髓小脑型共济失调Ⅲ型(SCA3/MJD)的发病机制. 方法:首先将正常和突变型ataxin-3的完整阅读框亚克隆至pGBKT7载体(ataxin-3-bait),然后以ataxin-3-bait为靶蛋白,筛选成人脑cDNA文库.结果:在6.5×106个转化子中共获得5个阳性克隆,测序表明,分离到Rho GDP解离抑制因子α、苏素1、阿米洛利敏感性神经元阳离子通道2和2个未知蛋白新序列与ataxin-3相互作用.结论:苏素1与ataxin-3可能存在相互作用,提示苏素化可能参与了ataxin-3蛋白的翻译后修饰和SCA3/MJD的发病过程.
-
ataxin-3相互作用蛋白的筛选及鉴定
目的筛选ataxin-3的相互作用蛋白并进行互作结构域分析,探讨ataxin-3的功能和脊髓小脑型共济失调Ⅲ型/马查多-约瑟夫病的发病机理. 方法应用酵母双杂交系统3,从成人脑cDNA文库中筛选和鉴定突变型ataxin-3的互作蛋白,构建ataxin-3蛋白羧基端Bait质粒,进行互作结构域分析.应用激光共聚焦显微镜观察ataxin-3与所筛到的互作蛋白在哺乳动物细胞中的共定位情况. 结果分离获得5个新的ataxin-3互作蛋白,视紫红质-二磷酸鸟苷解离抑制因子α、苏素-1、氨氯吡嗪脒敏感性神经元阳离子通道2和2个未知新序列.结构域分析显示除1个未知蛋白与ataxin-3 蛋白羧基端互作外,其余4个均与氨基端互作.在SH-SY5Y细胞的细胞核内,野生型ataxin-3与苏素-1共定位,突变型ataxin-3所形成的核内蛋白聚合体也与苏素-1共定位. 结论发现1个未知蛋白可能与ataxin-3蛋白羧基端互作,苏素1可能与ataxin-3蛋白氨基端互作,苏素化可能参与了ataxin-3蛋白的翻译后修饰和脊髓小脑型共济失调Ⅲ型/马查多-约瑟夫病的发病过程.
