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结肠癌中Ataxin-3表达及临床病理学的意义
目的 检测Ataxin-3蛋白在人结肠癌中的表达情况,初步探讨其与结肠癌临床病理特征关系.方法 将115例结肠癌、25例结肠上皮内瘤变,30例低级别上皮内瘤变,25例正常结肠组织标本制成组织切片,手用免疫组化SuperVision两步法检测Ataxin-3表达.结果 Ataxin-3蛋白的表达定位于细胞的胞质,着色呈棕黄或棕褐色.其在结肠癌组织中低于正常肠黏膜组织(P＜0.001),结肠癌组织与低级别上皮内瘤变表达有差异(P＜0.001),而结肠癌与高级别上皮内瘤变组比较无差异(P＞0.05).结论 Ataxin-3很可能是结肠癌发生发展过程中的重要分子.
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老年眼睑基底细胞癌患者术后组织Survivin、Ataxin-3和PTEN表达及意义
目的：检测老年眼睑基底细胞癌患者术后组织中 Survivin、Ataxin-3和 PTEN 的表达，探讨三者在不同临床特征中的意义。方法110例老年眼睑基底细胞癌患者术后组织及临床资料作为观察组，老年基底细胞乳头状瘤患者术后组织70例作为对照组，应用免疫组化方法检测两组中Survivin、Ataxin-3和PTEN 的表达。结果观察组Survivin 表达阳性率明显高于对照组（P＜0.05），观察组Ataxin-3和PTEN 表达的阳性率明显低于对照组（ P＜0.05），观察组Survivin、Ataxin-3和PTEN 的表达与肿瘤的大直径、Ki67增殖指数和临床分期密切相关。观察组Survivin 和Ataxin-3、Survivin 和PTEN 的表达具有负相关性，Ataxin-3和PTEN 的表达具有正相关性。结论老年眼睑基底细胞癌患者术后组织Survivin、Ataxin-3和PTEN 异常表达且具有协同作用，共同促进肿瘤的发生和进展。
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脊髓小脑共济失调3型致病蛋白ataxin-3毒性损伤机制
脊髓小脑共济失调3型是我国常见的三核苷酸序列异常扩增导致的常染色体显性遗传疾病.其致病蛋白ataxin-3具有泛素结合蛋白功能,调节细胞蛋白质稳态;同时ataxin -3蛋白功能可能还与细胞骨架等相关.异常扩展突变的ataxin-3有聚集倾向,在细胞内募集多种蛋白成分形成蛋白聚集体或包涵体,导致基因转录异常、蛋白稳态失衡、能量代谢障碍、运输障碍等多种细胞功能损伤以致细胞凋亡,进而影响细胞功能而致病.结合目前对多聚谷氨酸异常扩展突变疾病的研究现状,此文就现有的脊髓小脑共济失调3型致病机制进行综述.
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蛋白聚集体形成研究进展
神经退行性疾病(neurodegenerative disorder)是由于神经元进行性变性死亡导致的以中枢神经系统损害为主的神经系统疾病.其中包括帕金森病、阿尔茨海默症、亨廷顿舞蹈病等.当错误折叠的蛋白超过分子伴侣的重新折叠和泛素-蛋白酶体系降解能力的时候,错误折叠的蛋白质可以通过被介导的动力蛋白马达逆向转运至微管组织中心周围形成蛋白聚集体.蛋白聚集体的形成被认为是细胞的一种防御反应,隔离有毒的错误折叠蛋白进而进行清除.蛋白聚集体通路的研究可为多种神经退变性疾病提供治疗靶点.
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Machado-Joseph病基因检测及新突变位点的研究进展
马查多-约瑟夫病(Machado-Joseph disease,MJD)也被称为脊髓小脑性共济失调3型(spinocerebellarataxia 3,SCA3),是常见的遗传性脊髓小脑性共济失调亚型.发病机制尚不清楚,复杂的病情一直是临床工作者极大的挑战.得益于分子细胞遗传学迅猛发展,MJD症状前诊断及基因诊断成为现实并还在继续向前发展.逐步用于疾病诊断、鉴别诊断及治疗中,同时为遗传咨询提供科学依据.为寻求新突破,该文集中总结该疾病ATXN3突变致病机制及基因检测应用研究现状.更好地理解这些复杂的分子机制,探讨基因检测以及新基因突变位点的发现对这一致命性疾病的诊断及治疗意义.
关键词： Ataxin-3 ATXN3 CAG重复序列 脊髓小脑性共济失调3型 -
Ataxin-3融合蛋白表达、纯化及抗血清的制备
目的:表达GST-ataxin-3-N融合蛋白并制备GST-ataxin-3特异性抗体,为深入研究其功能及其在SCA3发病机制中的作用提供重要的技术和材料保障.方法:将人ataxin-3氨基端基因克隆入原核表达载体pGEX-4T-2,在大肠杆菌(E.coli)BL21中表达,用Glutathione sepharose4B凝胶亲和柱纯化目的蛋白.利用纯化的GST-ataxin-3-N蛋白制备多克隆抗体.结果:成功构建了原核表达载体,得到高表达量的融合蛋白,经亲和层析柱纯化获得较高纯度的GST-ataxin-3-N融合蛋白.以融合蛋白免疫新西兰兔得到Ataxin-3-N多克隆抗体,Western Blotting及免疫荧光均证实该抗体能够识别Ataxin-3-myc蛋白,具有较高特异性.结论:利用原核表达人GST-ataxin-3-N融合蛋白制备的Ataxin-3多克隆抗体具有较好的特异性,可用于该蛋白的相关研究.
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胃癌中Ataxin-3表达及与临床病理学的意义
目的 观察Ataxin-3蛋白在人胃癌组织中的表达及分布,探讨其在胃癌发生、发展过程中的意义及与临床病理学特征的关系.方法 采用免疫组化SuperVision两步法检测Ataxin-3在胃癌(265例)、正常胃黏膜(209例)、胃低级别上皮内瘤变(86例)及高级别上皮内瘤变(75例)组织中的表达,并对其表达与临床病理学特征的关系进行统计学分析.结果 Ataxin-3的表达,在胃癌组织中低于正常胃黏膜组织(P<0.001);胃癌组与低级别上皮内瘤变组中的表达有差异(P﹤0.001),而胃癌组与高级别上皮内瘤变组比较表达无差异(P>0.05);Ataxin-3表达与胃癌的Lauren组织学分型、肿瘤分化、远处转移及p53突变蛋白的表达存在相关性(P均<0.05).结论 Ataxin-3蛋白很可能在胃癌的发生、发展过程中起重要意义.
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脊髓小脑共济失调3型发病机制研究进展
脊髓小脑共济失调 3 型(Spinocerebellar ataxia type 3,SCA3)又称为马查德约瑟夫病(Machado-Jo-seph Disease,MJD),是我国遗传性共济失调(Hered-itary Ataxia,HA)中常见的亚型,约占所有遗传性共济失调的 60%,其患病率为 3~5/10 万,仅我国就有4 万余名患者[1-2].该病以进展性小脑型共济失调为主要临床表现,主要包括步态不稳、肢体摇晃、动作准确性变差等,可伴眼外肌麻痹、吞咽困难、舌肌纤颤、锥体征及锥体外系征等其他临床表现[3-4],多数患者在起病后 10~20 a内失去运动能力.
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脊髓小脑型共济失调Ⅲ型ataxin-3相互作用蛋白的筛选
目的:利用酵母双杂交系统3筛选与ataxin-3相互作用的蛋白质,探讨ataxin-3的功能和脊髓小脑型共济失调Ⅲ型(SCA3/MJD)的发病机制. 方法:首先将正常和突变型ataxin-3的完整阅读框亚克隆至pGBKT7载体(ataxin-3-bait),然后以ataxin-3-bait为靶蛋白,筛选成人脑cDNA文库.结果:在6.5×106个转化子中共获得5个阳性克隆,测序表明,分离到Rho GDP解离抑制因子α、苏素1、阿米洛利敏感性神经元阳离子通道2和2个未知蛋白新序列与ataxin-3相互作用.结论:苏素1与ataxin-3可能存在相互作用,提示苏素化可能参与了ataxin-3蛋白的翻译后修饰和SCA3/MJD的发病过程.
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MJD1基因真核表达载体的构建及其在SH-SY5Y细胞中的表达
目的:分别构建野生型MJD1以及CAG三核苷酸重复扩展突变型MJD1的真核表达载体;明确ataxin-3的多聚谷氨酰胺扩展突变是否可导致细胞核内蛋白聚合体形成.方法:分别以pAS2-1-MJD20Q和pAS2-1-MJD68Q为模板,通过PCR扩展野生型MJD1以及CAG三核苷酸重复扩展突变型MJD1的编码序列.PCR产物经Bam HI和Hind III双酶切后连入pcDNA3.1-Myc-His(-)B,通过酶切以及DNA测序鉴定重组质粒pcDNA3.1-Myc-His(-)B-MJD20Q和pcDNA3.1-Myc-His(-)B-MJD68Q.重组质粒转染SH-SY5Y细胞,通过Western印迹验证ataxin-3的表达,应用激光共聚焦显微镜观察转染细胞的核内蛋白聚合体形成情况.结果:酶切和DNA测序证实目的基因已被克隆入pcDNA3.1-Myc-His(-)B;其在转染细胞中的表达亦经Western印迹得以验证;SH-SY5Y细胞转染pcDNA3.1-Myc-His(-)B-MJD68Q后可见核内蛋白聚合体形成,而转染pcDNA3.1-Myc-His(-)B-MJD20Q后未见核内蛋白聚合体形成.结论:成功构建了MJD1的真核表达质粒;ataxin-3的多聚谷氨酰胺扩展突变可导致细胞核内蛋白聚合体形成.
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自吞噬途径参与降解多聚谷氨酰胺扩展突变型ataxin-3
目的 探讨自吞噬途径(autophagy)在脊髓小脑型共济失调3型或称马查多-约瑟夫病(spinocerebellar ataxia 3/Machado-Joseph disease,SCA3/MJD)发病机制中的作用.方法 将CAG拷贝数68次的ataxin-3真核表达载体pcDNA3.1-Myc-His(B)-MJD68Q在HEK293细胞中表达,采用特异性自吞噬途径抑制剂及激活剂处理细胞后,检测细胞中ataxin-3-68Q的表达水平.结果 抑制自吞噬途径水平,细胞内ataxin-3-68Q表达明显增加,细胞活性降低;反之亦然.结论 自吞噬途径参与降解细胞内多聚谷氨酰胺扩展突变型ataxin-3,减少胞内聚合物的形成,从而减轻细胞毒性.因此,提高机体自吞噬途径水平有望作为治疗SCA3/MJD的新方法 .
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ataxin-3相互作用蛋白的筛选及鉴定
目的筛选ataxin-3的相互作用蛋白并进行互作结构域分析,探讨ataxin-3的功能和脊髓小脑型共济失调Ⅲ型/马查多-约瑟夫病的发病机理. 方法应用酵母双杂交系统3,从成人脑cDNA文库中筛选和鉴定突变型ataxin-3的互作蛋白,构建ataxin-3蛋白羧基端Bait质粒,进行互作结构域分析.应用激光共聚焦显微镜观察ataxin-3与所筛到的互作蛋白在哺乳动物细胞中的共定位情况. 结果分离获得5个新的ataxin-3互作蛋白,视紫红质-二磷酸鸟苷解离抑制因子α、苏素-1、氨氯吡嗪脒敏感性神经元阳离子通道2和2个未知新序列.结构域分析显示除1个未知蛋白与ataxin-3 蛋白羧基端互作外,其余4个均与氨基端互作.在SH-SY5Y细胞的细胞核内,野生型ataxin-3与苏素-1共定位,突变型ataxin-3所形成的核内蛋白聚合体也与苏素-1共定位. 结论发现1个未知蛋白可能与ataxin-3蛋白羧基端互作,苏素1可能与ataxin-3蛋白氨基端互作,苏素化可能参与了ataxin-3蛋白的翻译后修饰和脊髓小脑型共济失调Ⅲ型/马查多-约瑟夫病的发病过程.
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Ataxin-3、nm23和Kiss-1在胃腺癌中的表达及意义
目的:检测胃腺癌中Ataxin-3、nm23和Kiss-1的表达,探讨三者的关系及临床意义.方法:选择我院收治的104例胃腺癌术后存档的蜡块及患者的临床资料作为观察组,选择切端为正常胃黏膜的组织70例作为对照组,应用免疫组化方法检测组织中Ataxin-3、nm23和Kiss-1的表达,观察三者在不同临床特征中的表达差别.结果:观察组中Ataxin-3、nm23和Kiss-1表达的阳性率明显低于对照组,观察组中Ataxin-3、nm23和Kiss-1的表达与肿瘤的分化程度、淋巴结转移、脉管浸润及是否有癌结节密切相关.线性相关分析显示观察组中Ataxin-3和nm23、Ataxin-3和Kiss-1的表达具有正相关性.结论:胃腺癌中Ataxin-3、nm23和Kiss-1低表达,Ataxin-3对抑制转移蛋白nm23和Kiss-1具有一定调节作用.
