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肝癌耐药细胞/Bel-7402/5-Fu细胞文献资料
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沉默DNA依赖蛋白激酶亚基对肝癌耐药细胞Bel-7402/5-Fu DNA损伤修复功能的影响
目的 探讨DNA依赖蛋白激酶亚基(DNA-PKcs)基因沉默后对肝癌耐药细胞Bel-7402/5-FuDNA损伤修复功能的影响.方法 采用阳离子脂质体法将shDNA-PKcs干扰质粒转染Bel-7402/5-Fu细胞,根据荧光细胞数计算转染率,实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)及Western blot检测DNA-PKcs的沉默效率;Western blot检测TopoⅡ、γ-H2AX蛋白表达;5-乙炔基-2'脱氧尿嘧啶核苷法检测细胞DNA合成.结果 质粒的转染效率为67％;qRT-PCR及Western blot检测结果显示,DNA-PKcs mRNA及蛋白水平的沉默效率分别为82.6％和71.8％;Western blot结果显示,实验组TopoⅡ蛋白表达水平比对照组低,差异有统计学意义(P＜0.05),γ-H2AX蛋白表达水平比对照组高,差异有统计学意义(P＜0.01).5-乙炔基-2'脱氧尿嘧啶核苷法结果显示,实验组DNA合成率比对照组低,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 shDNA-PKcs干扰质粒能下调Bel-7402/5-Fu细胞中DNA-PKcs、TopoⅡ蛋白的表达,抑制Bel-7402/5-Fu细胞DNA合成.
