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氧化苦参碱对小鼠淋巴结T细胞增殖的双向作用
目的检测氧化苦参碱(Oxymatrine,OMT)对刀豆蛋白A(Con A)刺激的小鼠淋巴结T细胞增殖的影响,探讨OMT对免疫系统的作用机制,为临床用OMT治疗免疫相关性疾病提供理论和实验依据.方法利用CFDA-SE染色,流式细胞术检测淋巴细胞在多克隆刺激剂Con A和OMT的共同作同下荧光强度的变化,并应用CELLQuest软件分析OMT对小鼠淋巴结T细胞增殖的影响程度.结果 500、125和31μg/mLOMT对小鼠淋巴结T细胞增殖呈剂量依赖性抑制,而16、8、4、2μg/mL OMT对小鼠淋巴结T细胞增殖起促进作用,但其剂量依赖关系不明显.结论 CFDA-SE染色和流式细胞术是分析淋巴细胞增殖的有力工具:OMT对小鼠淋巴结T细胞的增殖呈双向作用.
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氧化苦参碱对刀豆蛋白A刺激的小鼠淋巴细胞增殖影响的研究
目的应用荧光染料CFDA-SE (Carboxyfluorescein diacetate,succinimidyl ester)染色检测氧化苦参碱(Oxymatrine,OMT)对刀豆蛋白A(Con A)刺激的小鼠淋巴细胞增殖的影响.方法利用CFDA-SE染色,流式细胞术检测小鼠T淋巴细胞在多克隆刺激剂Con A和OMT的共同作同下荧光强度的变化,并应用相关软件分析OMT对小鼠淋巴细胞增殖的影响程度.结果培养48h,流式细胞仪检测的淋巴细胞CFSE荧光强度,对照组未出现子代峰,即淋巴细胞没有增殖.Con A组明显的出现3个峰,说明Con A刺激后48h细胞出现了明显的细胞增殖,与对照组相比荧光强度减半明显.在Con A+OMT各剂量组中,高剂量组即OMT500μg/mL组,原代峰显著高于Con A组,各子代峰显著低于Con A组,但与对照组比较差异无显著性,说明OMT明显抑制了淋巴细胞的增殖,中剂量组即OMT125μg/mL组和高剂量组结果一致,说明这一剂量的OMT仍然明显抑制小鼠淋巴细胞的增值,OMT低剂量组即OMT31μg/mL组和Con A组比较差异没有显著性,和对照组比较,各代细胞荧光强度差异有显著性,即这一剂量的OMT对淋巴细胞增殖抑制作用不明显.培养72 h后,各组之间荧光强度变化情况与48h的情况基本一致.经CELLQuest软件拟合后得到各项增殖指标显示,OMT在500μg/mL、125μg/mL和31μg/mL组呈剂量依赖地抑制Con A对淋巴细胞促增殖作用.结论 CFDA-SE染色和流式细胞术是分析淋巴细胞增殖的有力工具.OMT在500、125和31μg/mL呈剂量依赖地抑制淋巴细胞的增殖,即OMT对小鼠淋巴细胞增殖具有明显的抑制作用.
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牛大力多糖对小鼠T淋巴细胞增殖的双向调节作用
目的 从牛大力(Millettia Speciosa Champ.)提取纯化多糖,流式细胞术检测多糖对刀豆蛋白A(Con A)刺激引起的小鼠T淋巴细胞增殖的影响,探讨牛大力多糖对免疫系统的调节作用机制,为临床用牛大力治疗多种慢性疾病提供理论和实验依据.方法 提取、纯化牛大力多糖,利用CFDA-SE染色,流式细胞术检测多糖对Con A刺激引起的小鼠T淋巴细胞增殖的影响.结果 终浓度为160μg/mL、800μg/mL、4 ms/mL、20 ms/mL的多糖对小鼠T淋巴细胞增殖呈剂量依赖性抑制,而终浓度为5、25、50、125μg/mL的多糖对小鼠T淋巴细胞增殖起促进作用,剂量依赖关系不明显.结论 牛大力多糖对小鼠T淋巴细胞的增殖呈双向调节作用.
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活体染料CFDA-SE在淋巴细胞增殖研究中的应用
目的:探讨活体染料CFDA-SE在淋巴细胞增殖研究中的应用价值.方法:利用CFDA-SE染色、荧光抗体标记和流式细胞术,检测淋巴细胞及其亚群在多克隆刺激剂作用下荧光强度的变化,并应用相关软件分析其增殖情况.结果:PDB+ionomycin或ConA刺激48 h后均出现淋巴细胞分裂,表现为CFSE荧光强度的系列减半.环孢菌素A(CsA)可抑制ConA促进淋巴细胞增殖的作用,CFSE荧光无减半. ConA刺激48 h后,出现CD4+ T细胞和CD8+ T细胞增殖不同步的现象,72 h后这一现象更加明显.经ModFitTM软件拟合后,得到的各项增殖指标显示,ConA对CD8+ T细胞的促增殖作用强于对CD4+ T细胞的作用.结论:CFDA-SE染色结合荧光抗体标记和流式细胞术,是分析淋巴细胞增殖的有力工具.
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联合应用活体染料CFDA-SE和SNARF-1检测混合淋巴细胞反应
目的:建立一种能够对单向混合淋巴细胞反应中应答细胞的应答强度进行更全面评价的增殖检测方法.方法:BALB/cJ小鼠淋巴结细胞经CFDA-SE标记后作为应答细胞,BALB/cJ或C57BL/6小鼠脾细胞经丝裂霉素C处理后再用SNARF-1标记,作为刺激细胞,进行混合培养.混合培养96 h后收获细胞,用流式细胞术进行检测,分析SNARF-1-CFSE+应答细胞的增殖情况,并用ModFitTM软件拟和以获得更多增殖相关指数.结果:随着应答细胞分裂代数的增加,CFSE荧光强度逐渐减弱直至与刺激细胞无法分开,通过划除SNARF-1阳性细胞以确定应答细胞,解决了这一问题.应用ModFitrM软件,获得应答细胞的前体频率和增殖指数等多项重要的增殖相关指标.结论:联合应用CFSE和SNARF-1染色,结合流式细胞术,可作为评价混合淋巴细胞反应中应答细胞的应答强度的有力工具.
