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75例广东籍汉族人蛋白磷酸酶2A-B56γ亚基基因5'-侧翼区多态性分析
目的 探讨蛋白磷酸酶2A(pp2A)-B56γ亚基基因(PPP2R5C)启动子区的多态性和人群分布.方法 随机选取广东汉族健康人群的全基因组DNA,聚合酶链反应(PCR)获得PPP2R5C基因5'-侧翼区的目的 片段产物直接再测序,序列比对并确证遗传变异位点,采用HaploView软件进行等位基因型人群分布的分析、并与国际单体型图谱计划(Hap-Map)数据进行比较.结果 成功测序75例健康人(150条染色体)PPP2R5C基因-1933nt+241nt的目的 片段,发现该人群中存在5个遗传变异位点且各等位基因型在年龄组和性别之间分布差异无统计学意义(P>0.05),小等位基因频率(MAF)分别为-1447C>T(0.67%)、-1430G>A(19.33%)、-1274T>C(19.33%)、-563G>C(19.33%)和-526T>C(0.67%);与HapMap的中国北京人群和其他国外人群MAF和分布数据略为不同,但差异无统计学意义(P>0.05).结论 筛查出和首次报道PPP2R5C基因5'-侧翼区在中国南方广东汉族健康人群中的多态性位点及其等位基因型的分布.
关键词： 蛋白磷酸酶2A(PP2A) 调节亚基B56γ 基因5'-侧翼区 多态性 -
PP2A-B56γ高表达抑制镉诱导的人肝L02细胞DNA损伤
目的:探讨人正常肝细胞内蛋白磷酸酶2A-B56γ亚基(PP2A-B56γ,由PPP2R5C基因编码)高表达对镉诱导相关基因转录水平和DNA损伤效应的影响,并探讨其作用机制.方法:构建PP2A-B56 γ高表达L02-2R5Cc和空白载体对照L02-pBabe细胞模型；两种细胞分别给予CdCl2(Cd)、TNFα单独处理及联合处理后,实时荧光定量-PCR(QRT-PCR)检测不同处理组PPP2R5C和金属硫蛋白1B (MT1B) mRNA转录水平；彗星试验(SCGE)检测细胞DNA断裂损伤情况；并按照3×2的析因设计分析不同处理之间是否存在联合作用及作用类型.结果:与L02-pBabe细胞相比较,L02-2R5Cc细胞中PPP2R5C、外源性PPP2R5C-FLAG mRNA显著高表达(P＜0.05),细胞株构建成功.3种因素单独处理时,与阴性对照组相比,Cd降低PPP2R5C、升高MT1B mRNA表达,PPP2R5C基因高表达诱导的效应与Cd处理相反,TNFα降低PPP2R5C和MT1B mRNA表达(均P＜0.05)；析因分析表明,在PPP2R5C和PPP2R5C-FLAG mRNA检测中,PPP2R5C高表达与Cd、与TNFα之间均存在协同性交互效应(P＜0.05)；在MT1B mRNA检测中,PPP2R5C高表达与Cd和TNFα之间均表现为拮抗作用,PPP2R5C高表达与TNFα为协同抑制作用(均P＜0.05).SCGE检测表明,与阴性对照相比,Cd诱导彗星尾长、尾矩、尾部DNA含量和拖尾细胞阳性率显著增高(P＜0.05),TNFα、PPP2R5C高表达单独作用均不引起DNA损伤(P＞0.05),但两两联合作用的析因分析结果表明,TNFα预处理与Cd处理对DNA损伤具有协同作用,PPP2R5C高表达与Cd处理存在拮抗作用,交互作用均具有统计学意义(P＜0.05).结论:Cd抑制肝细胞PPP2A-B56γ编码基因的转录并显著诱导DNA损伤,PP2A-B56γ高表达抑制镉诱导的DNA损伤,而炎症因子可增强镉对细胞DNA的损伤.
关键词： 蛋白磷酸酶2A (PP2A) 调节亚基B56γ 镉 肝细胞毒性 基因转录调控
