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浙贝母病毒Y文献资料
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侵染浙贝母的浙贝母病毒Y(FVY)CP基因的原核表达及抗血清制备
目的:制备抗侵染浙贝母的浙贝母病毒Y(Fritillary virus Y,FVY)CP血清,为大田检测FVY和研究FVY与其他病毒之间的血清学关系奠定基础.方法:根据Genbank报道的FVY CP基因序列设计引物,扩增其CP基因.Blast分析FVY CP基因核苷酸序列与其他马铃薯Y病毒属成员CP基因的同源性.将CP基因插入表达载体pSBET,转化大肠杆菌BL21 (DE3) Plys E菌株,通过IPTG诱导表达.经12％ SDS-PAGE和5％ - 20％梯度SDSPAGE两次纯化CP,免疫小鼠获得抗CP血清,采用Western blot分析抗体的特异性.用原核表达的17种马铃薯Y病毒属病毒CP蛋白作为抗原,检测抗FVY CP血清是否能与其进行交叉反应.采用ELISA分析抗体能否与天然FVY病毒离子结合.结果:FVY CP基因与油点草病毒Y(TrVY)CP基因、大豆花叶病毒半夏分离物CP基因和小西葫芦黄花叶病毒六安分离物CP基因分别有81.2％、68.1％和67.2％的同源性.制备的抗体对FVY CP具有高度特异性,同时能与大豆花叶病毒半夏分离物(SMV-P)CP蛋白有中等强度的结合,与小西葫芦黄花叶病毒CP蛋白有弱的结合.结论:抗体能够与天然FVY病毒离子结合,因此可以作为该病毒的大田检测.
