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Ⅲ型原发性高草酸尿症一家系突变基因分析
目的 描述Ⅲ型原发性高草酸尿症(PHⅢ)1例患儿的临床特征并对该家系进行致病基因突变分析研究.方法 通过直接测序法对该家系可疑突变基因AGXT、GRHPR和HOGA1进行直接测序分析.以100例健康人作为对照.结果 患儿发病早(0.8岁),临床表现以肾结石和梗阻性肾病为主,但肾钙质沉着症表现轻微.实验室检查发现患儿有显著的高草酸尿、高钙尿和低枸橼酸尿.HOGA1基因分析发现2个新的杂合突变(复合杂合),一是位于6号外显子后l位和6号内含子第1位连续2个bp的突变(c.834_834+1GG＞ TT);另一个是位于6号外显子后l位碱基鸟嘌呤突变为腺嘌呤(c.834G＞A).这2个突变很可能导致剪切突变.100例非相关的健康人未发现存在相同突变.另外,该患儿还携带1个单核苷酸多态性(SNP) (c.715G＞A,p.V239I).其他2个候选基因AGXT和GRHPR未发现可疑突变.结论 新发现2个剪切突变位点与PHⅢ有关.这是亚洲首次报道PHⅢ患者及其突变基因分析.
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乙醛酸还原酶/羟基丙酮酸还原酶单克隆抗体的制备与鉴定
目的:制备鼠抗人乙醛酸还原酶/羟基丙酮酸还原酶单克隆抗体(mAb)并进行初步鉴定.方法:将正常成人肝组织匀浆离心并分离出肝脏胞质总蛋白,用肝脏胞质总蛋白免疫BALB/c 小鼠,采用杂交瘤技术制备mAb,并通过间接ELISA法、Western blot及免疫组化的方法对mAb进行特异性鉴定,通过免疫沉淀联合质谱和Uni-ZAP XR表达文库筛选鉴定抗原.结果:通过间接ELISA筛选获得杂交瘤细胞株ADB291,其分泌的mAb Ig亚类(型)为IgG1(κ),Western blot结果显示该mAb识别相对分子质量(Mr)为35 000的蛋白;对免疫沉淀获得的相应抗原回收、酶切、质谱鉴定为GRHPR.同时应用mAb ADB291对人肝脏cDNA表达文库(Uni-ZAP XR)进行筛选,筛选所获得的阳性噬菌斑测序结果显示2个阳性克隆插入序列均为GRHPR;阳性克隆转化表达后的Western blot 结果确认该抗体识别Mr 35 000的表达蛋白.结论:mAb ADB291特异识别的抗原为GRHPR,该mAb在GRHPR的功能研究和二型原发性尿草酸盐过多遗传疾病的临床诊断等方面具有应用价值.
