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双thymidine阻滞文献资料
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细胞周期蛋白A、B1、D3、E在同步化及非同步化G1期MOLT-4细胞中的表达
背景与目的:我们已经利用流式细胞术(flow cytometry,FCM)的多参数分析方法证实,用"双thymidine阻滞"获得的同步化细胞,其细胞周期蛋(Cyclins)A、B1、D3、E的表达严重失衡.但是,由于当时技术条件的限制,不可能对同期同步和非同步化的细胞中Cyclins A、B1、D3、E进行对照研究.本研究目的是用新建立的分选后的免疫印迹法(postsorting Western blot),比较Cyclins A、B1、D3、E在同期同步及非同步化G1期MOLT-4细胞中的表达,证实双thymidine阻滞法诱导细胞同步化用于分析正常细胞周期的不合理性.方法:以MOLT-4细胞为模型,用双thymidine阻滞法将细胞同步在G1/S转换期起始处的G1期,应用流式细胞术分选出同期非同步化生长的G1期细胞,采用DNA/Cyclins双参数分析法及免疫印迹法(Western blot),检测同期同步化及非同步化G1期细胞中Cyclins A、B1、D3、E的表达.结果:在分选的非同步化的G1期细胞中Cyclins A、B1几乎不表达,而在同期同步化的G1期细胞中具有明显的表达,Cyclins D3、E在同步化的G1期细胞中的表达明显高于同期分选的非同步化的G1期细胞,利用FCM的多参数分析方法和免疫印迹法所获得的结果一致.结论:用双thymidine阻滞干预方法获得的同步化细胞其Cyclins A、B1、D3、E并不能代表正常细胞内的表达水平,因而不是分析正常细胞周期的理想实验模型.
