首页 > 文献资料
-
Me32aT22/2L细胞内肝豆状核变性基因的表达恢复铜转运功能的实验研究
目的 观察Me32aT22/2L细胞内肝豆状核变性基因(ATP7B基因)的表达是否可以转运细胞内的多余铜及纠正铜对细胞的毒性作用.为基因治疗肝豆状核变性奠定基础. 方法 采用脂质体lipofectamin2000,将含ATP7B cDNA重组真核表达质粒pRc/CMV-WD导人Me32aT22/2L细胞内,免疫荧光检测ATP7B在细胞内的表达分布;高铜孵育培养观察外源性ATP7B的铜转运功能,以及检测ATP7B减低高铜对细胞的毒性作用. 结果 转染后的Me32aT22/2L细胞内可检测到ATP7B的表达,且分布在细胞核的周围;在高铜孵育24、48、72 h后,转染空载体组细胞内铜的含量分别为(600.60±69.71)ng/mg、(890.72±65.74)ng/mg和(1189.20±85.71)ng/mg,而表达有外源性ATP7B的细胞内铜的含量分别为(351.33±49.86)ng/mg、(427.38±30.95)ng/mg和(539.10±34.91)ng/mg,两组相比差异均有统计学意义(P,0.01);同时,与转染空载体组相比,转染ATP7B基因的细胞中的细胞凋亡率明显降低,差异有统计学意义(P<0.01). 结论 ATP7B基因转人Me32aT22/2L细胞后能得到有效表达,并可以将细胞内多余的铜转运出去,从而降低了铜对细胞的凋亡诱导作用.
关键词： 肝豆状核变性基因 基因表达 Me32aT22/2L细胞 铜转运 -
中国人WD基因第14和18号外显子的错义突变
目的 了解中国人肝豆状核变性(Wilson's disease,WD)基因第14和18号外显子的突变情况,与国外报道的这两个外显子的高突变频率进行比较.方法 应用聚合酶链反应-单链构像多态(PCR-SSCP)结合DNA测序技术,对44例无亲缘关系的WD患者及60例正常对照进行突变检测.结果 一例患者在14号外显子发生了Arg1041Pro(3121G→C)纯合错义突变,另一例患者在18号外显子发生了Asn1270Ser(3809A→G)杂合错义突变.结论 Arg1041Pro为未报道过的新型错义突变,Asn1270Ser突变与国外报道一致.但均未呈热区分布.
