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中国人胆固醇酯转运蛋白(CETP)基因的变异
CETP是反向胆固醇转运的重要载体.反向胆固醇转运是将胆固醇从周围组织向肝脏转运的过程.近来发现,CETP基因的变异影响这一过程,引起血脂水平的变化.CETP基因位于第16号染色体长臂上(16q13),全长25kb.AKITA等1994年首次报道了日本人中CETP基因变异的情况,突变的基因之一是第15外显子G→A的替换,导致442位氨基酸Asp→Gly的错义突变(D442G).但有关中国人CETP基因变异的情况,尚未见报道.
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p53蛋白过表达对大肠肿瘤细胞增殖与凋亡的影响
p53抑癌基因在散发性大肠瘤"腺瘤-癌"多阶段发生模式中起着重要作用[1].野生型p53蛋白是细胞增殖、分化、修复、衰老及凋亡等机制中的关键调节因子[2-4].p53基因发生错义突变,将产生变异蛋白,抑制细胞凋亡[5,6],促进细胞增殖转化而发挥促癌作用.
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即时定量PCR法和等位基因特异性寡核苷酸PCR法检测肺腺癌EGFR基因第21号外显子L858R突变的对比性研究
自从Lynch等[1]和Paez等[2]发现肺癌细胞中上皮生长因子受体(EGFR)酪氨酸激酶编码区基因突变以来,研究证明具有EGFR基因第19号外显子(de1746-A750)缺失突变或第21号外显子L858R错义突变的肺癌患者使用酪氨酸激酶抑制剂吉非替尼进行分子靶向治疗的有效率高达80%以上,而对于缺乏EGFR突变的患者采用上述治疗则基本无效[3].
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SYNC错义突变与遗传性帕金森病的关系
对近年来呈常染色体显性遗传的帕金森患者的临床资料进行回顾,编码 α-突触核蛋白的基因在发生不同种类型的错义突变后,会发生不同程度的聚集,这可能与呈常染色体显性遗传的帕金森病的发病有密切关系.根据二者之间的关系进而为今后的呈常染色体显性遗传的帕金森病的早期预防、诊断以及诊断后干预提供了新的思路.
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1例3型“青少年发病的成年型糖尿病”的基因突变分析
目的 对一例青少年发病的成年型糖尿病(MODY)患者进行基因分型.方法 运用Sanger测序技术对一例14岁的青少年的成人发病型糖尿病女性患者进行常见MODY基因肝细胞核因子1α(HNF1A)、肝细胞核因子4α(HNF4A)及葡萄糖激酶(GCK)基因直接测序,采用MutationSurveyor软件对测序结果进行分析.结果 DNA测序发现HNF1A基因的1号外显子区域发现一个杂合的错义突变,c.293C>T(p.A98V).这一突变会导致C肽及胰岛素水平的降低从而引发高血糖症状的发生.结论 借助于DNA测序技术,该患者终被诊断为HNF1A基因变异导致的MODY3.
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X-连锁肾上腺脑白质营养不良的分子诊断方法研究
X-连锁肾上腺脑白质营养不良(X-linked adrenoleukodystrophy,X-ALD)是过氧化物酶体病的一种,由ABCD1基因突变所致,该疾病基因定位于Xq28,其成熟mRNA长约3 700bp,编码1个含745个氨基酸残基的蛋白质,称为ABCD1蛋白.自ALD的致病基因被定位克隆以来[1],至今国际上已报告了900余种ABCD1基因突变(www.X-ald.nl),其中错义突变占60%[2].笔者于2006年7月至11月分别对6个X-ALD家系进行基因突变分析,现报告如下.
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聚合酶链反应直接测序法检测细胞色素b5还原酶基因突变
在DNA突变检测方法中,DNA测序能精确判断突变部位和性质,是具决定性的一步.聚合酶链反应(PCR)产物经直接测序分析而不预先克隆到测序载体上,使序列分析的效率极大提高.我们从遗传性高铁血红蛋白血症患者外周血白细胞提取总RNA,经逆转录(RT)合成cDNA,用半巢式PCR方法扩增其NADH-细胞色素b5还原酶编码基因,并进行了PCR产物直接序列分析,取得满意的结果.证明逆转录PCR产物直接测序法是检测基因错义突变的迅速有效的方法.
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结核分枝杆菌耐药机制及耐药性检测的研究进展
自20世纪80年代以来,结核病疫情重新上升,成为严重危害公共卫生的问题之一。据世界卫生组织估计,目前全球约有20亿人感染结核分枝杆菌(结核菌),其中约有5 000万人感染耐药结核菌[1]。因此对结核菌耐药机制和耐药性检测的研究意义重大。结核菌的耐药性的产生主要是由于不合理用药引起的结核菌内抗结核药物作用靶基因突变所致[2]。目前检测结核菌耐药性的方法有表型检测和基因型检测两大类。 一、结核菌的耐药机制 染色体基因变异是结核菌产生耐药性的主要机制。结核菌95%以上的基因变异是直接由于抗结核药物引起[2]。细菌可以通过染色体自身突变或者外源遗传因子如质粒或转座子而获得耐药性,但迄今为止结核菌中尚未发现质粒和转座子介导的耐药[2]。Musser等经大量研究发现大约12种基因突变和结核菌的耐药性有关。已确定主要为基因突变引起耐药性的抗结核药有利福平(RFP)、异烟肼(INH)、链霉素(SM)、吡秦酰胺(PZA)、乙胺丁醇(EMB)、喹诺酮类等。 1.RFP通过和结核菌中DNA依赖的RNA聚合酶的结合来抑制转录过程,导致细胞死亡[3]。96%RFP耐药菌株的产生是因为编码该酶β亚基的rpoB基因发生改变所致。这些改变主要是集中在rpoB中的81个碱基区域(利福平耐药决定区)内的各种突变,也有少量碱基插入或缺失,共35种,其中43%为531-Ser错义突变,此位点突变常见;36%为526-His错义突变。rpoB基因中513、526、531位点突变导致RFP高度耐药(MIC>32 μg/ml),尤以513位点突变产生的耐药性高;514、521、533位点突变导致RFP低度耐药(MIC<12.5 μg/ml)[4]。已知rpoB基因的9种突变同时和结核菌对利福布丁(refabutine)、利福喷丁(refapentine)等的耐药有关[3]。 2.INH被结核菌内过氧化氢-过氧化物酶(由katG基因编码)激活,作用于enoyl-ACP还原酶(由inhA基因编码),抑制杆菌酸和细胞壁合成。结核菌耐INH的机制比较复杂,katG基因的突变、部分缺失是主要机制,该基因的完全缺失在INH耐药株中只占很小一部分但导致高度耐药[5]。多数文献都对KatG基因中315位AGC突变成ACC及463位CGG突变成CTG作了报道,认为这两个突变和耐药性关系密切[6]。但近年来有些学者认为R463/L突变无意义[7]。inhA、katA、ahpC等基因和结核菌对INH的耐药关系正在研究之中,近又提出kasA可能是一个耐药相关基因[8]。InhA 突变也对乙硫异烟胺1314th(ETH 1314th)耐药[3]。
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错配修复基因hMLH3在家族性胃癌中的突变
目的:检测错配修复基因hMLH3在家族性胃癌中的突变情况,以探讨hMLH3在家族性胃癌中的作用.方法:采用聚合酶链反应(PCR)、变性高效液相色谱分析(DHPLC)和直接测序法,检查有遗传背景的16个胃癌家系(共84名成员)的错配修复基因hMLH3突变情况.胃癌家系选择参考以下标准:(1)至少连续两代;(2)至少2例胃癌患者;(3)至少有1例患者为其他患者的一级亲属;(4)至少有1例患者50岁前被诊断出胃癌.结果:所有样品的外显子均成功进行PCR扩增,DHPLC分析和基因测序.共在5个家系中发现5处错义突变(31.3%,5/16),4处在外显子1,另外1处在外显子12.家系6中hMLH3的突变与胃癌发生呈现出较强的相关性,而另外几个家系中的突变情况与胃癌没有表现出明显的相关性.在散发性胃癌及正常对照中未发现突变的存在.结论:hMLH3基因在家族性胃癌发生中可能为一低风险基因,他可能通过与其他基因互相叠加、共同起作用.
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中国人胰淀素基因错义突变的研究
2型糖尿病(T2 DM)具有强烈的遗传性,已发现一些基因与T2DM关联.1996年Sakagashira等[1]报告一种新的基因突变,即胰淀素(amylin)基因错义突变(S20G)与日本人DM的发病相关联,但此后台湾、日本及德国等的研究未能发现有关联[2-4],至今尚有争议.为此本研究探讨了中国人群中S20G的突变率,以及它对DM发病和糖代谢的影响.
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一个葡萄糖激酶基因Gly162Asp错义突变致青少年发病的成年型糖尿病2型家系报告
目的 对一个高度怀疑青少年发病的成年型糖尿病2型(MODY2),即葡萄糖激酶(GCK)基因突变所致MODY家系寻找基因突变位点,并探讨其临床特点. 方法对1例意外发现血糖升高、无酮症倾向、有糖尿病家族史的10岁女孩采用芯片捕获高通量测序方法进行致病基因检测,发现其携带GCK基因突变,对其家系进行调查,收集家系成员相关临床资料并取得家系成员的外周血基因组DNA,使用Sanger测序技术对家系成员进行筛查. 结果 该家系的5名成员检测到GCK基因(NM_000162)第5号外显子c.485G>A(p.Gly162Asp) 杂合错义突变,其中有4例为糖尿病患者,1例为IGR,该突变与糖尿病和IGR共分离,在白种人群中已有报道,在中国人群中为首次发现. 结论 GCK基因突变c.485G>A是该MODY2家系的主要致病基因.
关键词: 青少年发病的成年型糖尿病 葡萄糖激酶基因 错义突变 -
先天性QT延长综合征家系一新的错义突变
先证者(图1中Ⅱ-2)女,40岁,心电图QTc 560 ms;首次发病年龄35岁,运动和情绪激动时易诱发晕厥.根据先天性QT延长综合征(long QT syndrome,LQTS)诊断标准[1]诊断为LQTS.先证者的儿子(图1中Ⅲ-1)QTc 520 ms,没有任何症状.签订知情同意书后进行家系调查(图1).
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癌基因BRAF突变在黑色素细胞痣与黑色素瘤中的作用
BRAF(v-raf murine sarcoma viral oncogenehomolog B1)是一种癌基因,位于RAS/RAF/MEK/ERK信号传导通路上.2002年以来,学者们相继发现在黑色素瘤中存在高频率的BRAF突变,这种T到A的突变发生在第15号外显子激酶结构域的单个位点,导致第600个密码子编码的氨基酸发生错义突变(BRAF~(V600E)),从而激活RAS/RAF/MEK/ERK通路,揭示可能与肿瘤发生相关~([1]).
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肌萎缩侧索硬化家系致病基因 S O D1 的突变检测
目的 检测一个香港肌萎缩侧索硬化(ALS)家系的铜、锌超氧化物歧化酶基因(Cu/Zn super-oxide dismutase ,SOD1)的突变位点.方法 对先证者 SOD1的5个外显子进行PCR扩增后进行san-ger测序.结果 在先证者的 SOD1第5外显子发现一个已知的致病性错义突变c .(449 T > C )(p . Ile150Thr).对家系中其他患者和未发病者进行验证 ,发现此突变在该家系中与疾病共分离.结论 SOD1错义突变c .(449T>C)(p .Ile150Thr)是该肌萎缩侧索硬化家系患者发病的的原因.
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大龄儿童尼曼-匹克病1例
患者 男性,14岁3个月,因“发现血小板减少8+个月”于2013-08-29收入四川大学华西第二医院治疗。病史采集:患者于8+个月前在当地医院体检时发现 PLT 减少,外周血 PLT 计数为8.0×109/L,尚未伴出血表现,门诊予输注 PLT 制剂后PLT 计数恢复至正常,此后未进行复查及治疗。入院前7 d,因入学体检查血常规示 PLT 计数为15.0×109/L,遂收入本院。入院查体:无特殊面貌,全身无出血表现,脾脏因腹部脂肪层过厚触诊不清楚,脊柱及四肢无畸形,活动自如,步态平稳,智力、视力及听力正常,肌张力正常。辅助检查:血常规检查结果示WBC 计数为8.3×109/L,中性粒细胞绝对计数为6.2×109/L,Hb 水平为158 g/L,PLT 计数为15.0×109/L。血脂检查结果示 HDL 水平为0.65 mmol/L,其余指标正常。胸骨骨髓穿刺结果符合 PLT 减少骨髓象,粒/红倒置,见组织细胞吞噬血细胞现象,全血片检查可见海蓝组织细胞和尼曼-匹克细胞(图1)。腹部彩色多普勒超声检查结果示脾脏肋间厚约为7.6 cm,肋下厚约为10.5 cm,其右缘达腹中线右侧约为4.6 cm,脾脏明显长大,胆囊结石。胸部 X 射线摄片结果未见异常。眼底检查结果未见樱桃红斑。入院诊断:尼曼-匹克病(Nimannn-Pick′s disease,NPD)。因脾大、脾功能亢进,经专业组讨论并完善基因检测后转入小儿外科行“脾脏切除活检术”。术后脾脏组织病理学检查结果示:镜下见脾大,脾红髓扩大、白髓存在,红髓中充满细胞质丰富、有多量细微空泡的组织细胞,另可见散在巨核细胞,淋巴结髓窦内也可见上述改变,切除脾组织病理学诊断为:尼曼-匹克病的脾脏改变。家族基因检测示:①患者基因测序结果为:SMPD1基因外显子1发生c.4_7delC移码突变;SMPD1基因外显子2发生 c.995C > A (Pro332 His)错义突变(图2)。②其母亲基因测序结果为:SMPD1基因外显子1发生 c.4_7delC 移码突变。③其父亲及祖母基因测序结果为:SMPD1基因外显子2发生 c.995C>A (Pro332 His)错义突变。上述家族基因检测结果符合遗传学规律。患者入院后予预防出血、维生素 C、E 治疗,并输注辐照机采 PLT 补充 PLT,PLT 计数恢复至正常后出院。
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人GJB2基因错义突变表达载体构建及鉴定
目的 构建6种分别携带GJB2基因错义突变A40G、V371、L90P、L90V、V84L和W44C的真核表达载体,转染HEK293细胞.建立6种错义突变的稳定表达细胞系.方法 以野生型Cx26-EGFP融合蛋白质粒为模板,用Stratagene公司定点突变试剂盒构建错义突变表达载体,直接测序鉴定序列正确性,选取含有突变的载体转染HEK293细胞,G418选择性培养2周,流式细胞仪筛选表达阳性细胞,扩增培养形成稳定表达人Cx26突变的HEK293细胞系.培养细胞用4%多聚甲醛固定,鬼笔环肽和4',6-二脒基-2-苯基吲哚衬染细胞核,荧光显微镜下检测结果.结果 6种突变表达载体经过测序,均含有相应突变,无多余突变出现,转染后均可在细胞间形成缝隙连接,呈现绿色荧光.结论 成功构建6种携带GJB2基因错义突变的真核表达载体,为进一步研究错义突变致聋原因奠定了实验基础.
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NDP基因新突变G113D导致X连锁隐性遗传家族性渗出性玻璃体视网膜病变
目的 对一个X连锁隐性遗传家族性渗出性玻璃体视网膜病变(FEVR)家系进行致病基因的突变筛查研究.设计 基因研究.研究对象 一个中国北方FEVR家系.方法 应用聚合酶链式反应(PCR)和sanger测序法对FEVR的致病候选基因LRP5、FZD4、TSPA N12和NDP的全部外显子进行突变筛查,将测序结果与Genebank数据库的正常序列进行比对,将所发现的候选基因碱基改变在50个无关正常对照人群中进行PCR和测序验证.主要指标 基因序列.结果 在NDP基因的外显子3发现一个半合子错义突变G113D与家系男性先证者共分离,先证者母亲显示为G113D的杂合携带者,该突变在家系其他成员及正常人群中没有检测到.结论 该家系的FEVR系由NDP基因外显子3的一个新的错义突变G113D导致.
关键词: 家族性渗出性玻璃体视网膜病变 NDP基因 错义突变 -
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先天性铁粒幼细胞性贫血研究获突出进展
北京协和医院血液内科与国家纳米中心合作,在对中国人骨髓增生异常综合征的一种罕见类型--先天性铁粒幼细胞性贫血( congenital sideroblastic anemia, CSA)患者的研究中取得突出进展。该研究鉴定出世界范围内第2例由GLRX5基因错义突变导致的CSA,并进一步探讨了人源GLRX5蛋白的生化功能,为中国患者后期治疗和发病机制探索指引了方向。
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先天性巨结肠患者SEMA3C/SEMA3D基因错义突变对Semaphorin3蛋白表达的影响
目的 明确先天性巨结肠患者携带的5个SEMA3C/SEMA3D基因错义突变对Semaphporin 3蛋白表达的影响作用.方法 将野生型和突变型AP-tagged SEMA3质粒分别转染HEK293T细胞,72h后收集细胞培养液上清并提取细胞总蛋白,利用融合蛋白N-末端含有的碱性磷酸酶在底物PNPP存在时可以发生颜色变化的特性,通过对各野生型和突变型质粒转染后所表达的AP-SEMA3蛋白在特定波长的吸光值进行检测以达到蛋白定量的目的.结果 5个错义突变中的4个(SEMA3C:V337M;SEMA3D:H424Q、V457I、P615T)都会不同程度地影响相应Semaphorin 3蛋白的表达和分泌,说明它们可能通过严重影响蛋白的表达量而妨碍蛋白功能的正常行使.结论 Semaphorin 3作为一类经典的神经元轴突导向因子,很可能参与了肠神经系统的发育调控并在功能失常的情况下引发先天性巨结肠缺陷表型.
关键词: 先天性巨结肠 Semaphorin 3基因 错义突变 碱性磷酸酶 蛋白表达