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磷脂酰肌醇聚糖A类基因突变检测方法的研究进展及其应用
遗传毒性检测是化学品安全评价和健康风险评估的重要内容。经典遗传毒性检测方法,如:鼠伤寒沙门菌回复突变试验( Ames试验)、染色体畸变分析和微核试验已经广泛地应用于毒物、药物的筛选和遗传毒性评价。近年来,一些新的遗传毒性试验相继发展并逐渐应用于化学品安全评价。磷脂酰肌醇聚糖 A 类( phosphatidylinositol glycan class-A, Pig-a)基因突变分析是基于体细胞基因突变的新的体内遗传毒性检测方法[1]。 Pig-a基因突变不仅可用于化学物急性暴露引起的遗传毒性识别,也可用于化学物慢性、亚慢性暴露所引起的遗传毒性筛查,且符合当前国际上对于实验动物使用所倡导的3R 原则,即:减少( reduction )、替代(replacement)和优化(refinement)。因Pig-a基因突变可采用流式细胞仪检测,灵敏、高效、成本低、操作简单、适用于高通量分析的需求,相继被经济合作与发展组织( Organization for Economic Co-operation and Development, OECD)等国际组织推荐为遗传毒性评价的标准组合试验[2]。因此,笔者综述了Pig-a基因突变检测方法研究进展和应用。
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结核分枝杆菌对乙胺丁醇耐药突变基因检测方法的建立
乙胺丁醇(EMB)是一线抗结核药物,近的研究结果表明,结核分枝杆菌(结核菌)对EMB耐药的产生与阿拉伯糖基转移酶编码基因embB改变有关.其中embB基因(尤其是306位密码子)突变是产生对EMB耐药的主要分子机制.聚合酶链反应-单链构象多态性分析(PCR-SSCP)是近年发展起来的常用的基因突变分析技术,结合染色法(silver staining),使其应用前景更为广阔.我们应用PCR-SSCP银染技术和PCR-直接测序法对河南省耐药监测中收集的87株结核分离株embB基因进行了研究.
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X-连锁肾上腺脑白质营养不良的分子诊断方法研究
X-连锁肾上腺脑白质营养不良(X-linked adrenoleukodystrophy,X-ALD)是过氧化物酶体病的一种,由ABCD1基因突变所致,该疾病基因定位于Xq28,其成熟mRNA长约3 700bp,编码1个含745个氨基酸残基的蛋白质,称为ABCD1蛋白.自ALD的致病基因被定位克隆以来[1],至今国际上已报告了900余种ABCD1基因突变(www.X-ald.nl),其中错义突变占60%[2].笔者于2006年7月至11月分别对6个X-ALD家系进行基因突变分析,现报告如下.
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结节性硬化症肺部受累二例临床及基因突变分析
结节性硬化症(tuberous sclerosis complex,TSC)是一种常染色体显性遗传病,患病率约1/1万~1/3.1万,其临床主要特征为面部皮脂腺瘤、皮肤色素脱失斑、癫痫发作和智能减退.目前已确定有2个基因与TSC有关.TSC1(hamartin)位于染色体9q34,包含23个外显子,TSC2(tuberin)位于染色体16p13.3,包含41个外显子[1,2].TSC1及TSC2基因被认为是肿瘤抑制基因[3].结节性硬化症肺部受累非常罕见.现报道2例并应用聚合酶链反应(PCR)及单链构象多态性(single strand conformation polymorphism,SSCP)进行基因突变分析.
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先天性遗传代谢缺陷病诊治处理原则
先天性遗传代谢缺陷病(inborn errors of metabolism,IEM)是一类单基因遗传病的总称,是指酶、载体或膜等功能缺陷导致相应代谢途径阻断,代谢底物和(或)旁路代谢产物在体内堆积、终末产物缺乏的一类疾病,绝大多数属于常染色体隐性遗传.至今为止已发现500多种IEM.该类疾病虽然单一病种发病率低,但由于其种类较多,累计起来,总体发病率并不低.2002年日本Kanazawa医科大学对14200名新生儿进行了22种气相色谱-质谱(GC-MS)分析筛查,结果发现13例代谢缺陷病,发病率高达1/1100[1,2].一项针对我国北京两所医院高危儿童的筛查结果表明,393例患儿中有51例(12.98%)患有IEM.2002年~2006年广州市儿童医院通过尿GC-MS、血浆氨基酸、酰基肉碱和基因突变分析等筛查了1000余例疑似患儿,诊断了50余例IEM,阳性率高达5%.
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生物芯片技术及其在肿瘤研究的应用进展
生物芯片是近几年来发展起来的一项新兴生物技术,它将大量的核酸或蛋白质等的探针同时有序的固化于固相支持物表面,然后与样品进行杂交,可以实现对核酸、蛋白、细胞等生物组分进行快速、准确、平行、大量的检测.这些芯片具有体积小、便于携带、无污染、分析速度快、所用样品少等优点,广泛应用于基因表达分析、新基因发现、基因组文库作图、基因突变及多态性分析、疾病诊断、药物筛选、基因测序等领域.本文就其技术原理、操作步骤、在肿瘤研究中的应用、存在的问题及发展前景作一简要综述.
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急性髓细胞白血病IDH基因突变临床特征及预后意义
目的 基因突变在急性髓系白血病(acute myelocytic leukemia,AML)患者预后判断方面具有重要意义,其中异柠檬酸脱氢酶(isocitrate dehydrogenase,IDH)基因突变与AML的临床特征和预后密切相关.本研究探讨AML患者IDH基因突变的发生率、临床特征及预后意义.方法 选取滨州医学院附属医院2015-01-01-2017-01-31经MICM分型确诊的120例初治AML患者,采用骨髓单个核细胞基因组DNA,PCR方法扩增IDHl、IDH2基因4号外显子,基因测序检测IDHl及IDH2基因突变,分析患者临床特征并评估其疗效.结果 120例AML患者中16例检测到IDH基因突变,突变率为13.33%,其中IDHl突变5例(4.17%),IDH2突变11例(9.17%).未发现有患者同时获得IDHl和IDH2突变.突变组中位年龄55岁,未突变组中位年龄40岁,差异有统计学意义,P=0·0004;初诊外周血血小板计数为77×109 L-1,明显高于未突变组的33×109 L-1,差异有统计学意义,P=0.0002.IDH突变均发生在AML-M4/M5中,未见其他AML亚型.IDH基因突变与正常核型、NPMl基因突变,尤其是NPMl基因突变未伴FLT3-ITD基因突变的基因型相关.突变组的化疗完全缓解率为50·00%,低于未突变组的79.59%,差异有统计学意义,P<0.01.不伴NPM1基因突变的患者中,IDH基因突变组1年总生存率为50.00%,低于未突变组的86.42%,差异有统计学意义,P<0.01.所有患者中,IDH基因突变组1年总生存率为71.43%,低于未突变组的86.73%,但差异无统计学意义,P>0.05;在正常核型和伴NPM1突变患者中,IDH基因突变组与未突变组1年总生存率差异均无统计学意义,均P>0.05.结论 IDH基因突变更多见于正常核型的AML患者,常与NPMl基因突变相伴随,与患者治疗疗效具有一定相关性,提示是预后不良的分子标志.
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肝豆状核变性2个家系的基因突变分析
肝豆状核变性也称Wilson病( Wilson’ s disease, WD),是ATP7B基因突变导致的一种常染色体隐性遗传性疾病。基因诊断可用于早期发现不典型患者。本文应用基因测序诊断了2例不典型WD病例,并对其父母进行了基因突变分析。
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急性髓系白血病患者转录因子PU.1基因突变分析及其表达水平的检测
急性髓系白血病(AML)以细胞分化阻滞、骨髓或外周血中粒系或单核系祖细胞积聚为特点.除部分患者具有t(15;17)、t(8;21)、inv16等染色体异常外,其余AML患者发病原因仍不清楚.有研究表明转录因子PU.1可调节正常造血系统特别是单核-巨噬细胞系的分化,其功能的异常可能与AML的发生有关[1].我们采用单链构象多态性聚合酶链反应(PCR-SSCP)加直接测序方法对AML患者进行PU.1基因突变检测,并在此基础上进一步对其mRNA的表达进行了研究,探索该基因与AML发生的关系.
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悬浮点阵技术用于分析β地中海贫血基因突变类型
现已知人类β地中海贫血(β珠蛋白合成障碍性贫血,β地贫)突变种类有170多种,突变类型和突变频率随地域和人种变化很大,其中中国大陆人群常见的突变频率较高的突变类型有十几种.目前,临床上检测β地贫突变类型为常用的方法是PCR反向点杂交(PCR-RDB).20世纪90年代末,伴随着信息技术和"生物芯片"技术的发展,一种新的适于临床应用的高通量、自动化的诊断分析技术平台--液态悬浮点阵检测技术的诞生,使复杂基因突变分析实现自动化、高通量化成为可能.通过对8种已知β地贫基因突变类型(大约占中国大陆人群突变发生频率的93.2%)的检测分析[2],初步探讨液态悬浮点阵检测系统在临床β地贫基因突变检测的应用前景.
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基因芯片技术在医学研究中的应用
基因芯片(Gene chip)又称DNA芯片(DNA chip)、DNA阵列(DNA arrays)、寡核苷酸微芯片(Dligonucleotide microchip),是近年发展起来的又一新的分子生物学研究工具,它综合了分子生物学、半导体微电子技术、激光化学、计算机科学等众多学科领域的相关技术,使研究者得以自动化、快速、平行地对大量的生物信息加以分析,从而成为基因测序、基因突变分析、基因表达等方面研究的高效手段之一.这项技术是90年代初由美国Affymetrix公司首先发展起来的,在随后的几年内技术不断完善,至今已在医学研究的各个领域中日渐显现出其应用价值,特别是随着人类基因组计划顺利利进行,越来越多的基因序列被解码,基因组研究的重心自然地从结构基因组学转到了功能基因组学,基因功能的研究将成为"后基因组计划"时期迫切需要解决的问题,DNA芯片技术的出现为基因功能的研究提供了一个强有力的工具[1].
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变性高效液相色谱检测法在基因突变分析中的应用
基因存在于染色体上,是遗传的基本结构和功能单位.基因突变在生物进化及遗传某些疾病的发病中起着重要作用.
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FGFR3基因突变分析在产前诊断及短肢畸形胎儿中的应用
软骨发育不全(achondroplasia,ACH)是四肢短小畸形中较常见的遗传性骨骼系统疾病,呈常染色体显性遗传,外显率100%,是由于成纤维细胞生长因子受体3(fibroblast growth factor receptor 3,FGFR3)基因突变所致[1],导致严重的身材矮小及头面和四肢畸形.本文通过分析FGFR3基因,对3例妊娠早期曾生过1胎ACH患儿的孕妇进行产前基因诊断,并对2例B超诊断为短肢畸形的胎儿进行基因诊断.
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结核分支杆菌链霉素耐药性的杂交检测
我国是结核病疫情严重的国家之一,其主要原因是耐药(DR-TB)和耐多药(MDR-TB)结核病的广泛分布和迅速传播.MDR-TB的流行已成为20世纪全球结核病第3次回升的4大原因之一.因此,耐药问题已成为结核病防治工作中迫切需要解决的问题.链霉素(SM)作为主要的一线抗结核药物之一,对其耐药性的研究日益受到重视.国外也有报道[1]:认为结核分支杆菌耐链毒素的产生是由于其核糖体蛋白S12编码基因(rpsL)和16SrRNA编码基因(rrs)的突变所致.我们采用PCR-寡核苷酸探针反相斑点杂交技术检测了47株肺结核病人临床分离株(其中药物敏感株13株,耐SM或含耐SM的耐多药株34株),并对21例结核病人痰标本直接进行rpsL基因、rrs基因突变分析,现将结果报告如下.
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血栓与止血实验诊断的发展与应用
随着科学技术和医学科学的发展,血栓与止血实验检测的新技术和新方法不断涌现,为血栓病和出血病的实验诊断和基础研究提供了崭新和准确的科学手段.本文就此作一浅述.
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妊娠早期意外诊断的Gitelman综合征一例及其家系基因突变分析
患者(先证者)女性,27岁,孕10周,因2周前产检意外发现低钾血症于2015年4月8日入院,平素无心悸、气促、手足麻痹、肌无力等症状;无妊娠剧吐症,无高血压病史;初胎妊娠;血压111/80 mmHg(1 mmHg=0.133 kPa),体重指数(BMI)19.15 kg/m2,发育正常,心肺腹及神经系统查体阴性。
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胃肠道间质瘤kit、人血小板衍生生长因子受体α基因突变分析与临床病理研究
胃肠道间质瘤(gastrointestinal stromal tumor,GIST)是由突变的kit[1]和人血小板衍生生长因子受体α( platelet derived growth factor receptor alpha,PDGFRA)[2]基因驱动的消化道常见的间叶源性肿瘤.kit和PDGFRA突变的确定不仅可以评价原发疾病的预后[3],而且可以判断靶向治疗的获益情况[4].本研究对106例GIST标本行kit和PDGFRA基因突变检测,分析其与临床病理关系.
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血栓与止血的系统生物学分析和多参数仪器检测
目前,血栓与止血的检测方法已由筛查发展到诊断试验;由手工检测发展到自动化仪器检测;由观察试验的终点发展到观察试验的功能;由一个试验一种方法发展到一个试验多种方法检测;由单个基因突变分析发展到基因总体分析等,现以系统生物学分析技术和多参数仪器检测为例作一叙述.
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成人激素抵抗性肾病综合征遗传学机制
激素抵抗性肾病综合征(SRNS)为难治性肾病综合征,常发展至终末期肾病,但其发病机制尚不明确.近年来,越来越多的证据表明编码足细胞相关蛋白的基因变异是部分SRNS的病因.早足细胞相关蛋白基因变异仅见于家族性及儿童散发SRNS,但近来发现这些基因变异也与成人散发SRNS相关.本文系统性综述当前发现与成人SRNS相关的6个主要足细胞相关蛋白基因,旨在阐明成人SRNS遗传机制,为干预疾病进展、促进临床诊断及治疗提供理论依据.
关键词: 激素抵抗性肾病综合征 足细胞相关蛋白 基因突变分析 -
低渗尿、皮髓交界肾囊肿、肾功能不全
22岁女性患者,因“体检发现血清肌酐升高”就诊.患者烦渴多饮,血清肌酐升高,无蛋白尿、血尿,尿比重下降,双肾B超见沿皮髓交界分布的肾囊肿形成.基因分析发现NPHP1和ZNF423两种肾消耗病致病性基因突变,诊断为青年型肾消耗病.该患者为国内首例通过基因分析诊断的肾消耗病.