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兔抗弓形虫Ⅰ型液泡型质子焦磷酸酶多克隆抗体的制备及鉴定
目的 制备兔抗弓形虫I型液泡型质子焦磷酸酶(TgVP1)多克隆抗体并鉴定其应用.方法 选择弓形虫ME49株TgVP1氨基酸序列中的两条多肽,TgVP1-1与TgVP1-2,进行人工合成,并将其与KLH偶联作为抗原免疫新西兰大耳白兔,收集血清制备多克隆抗体,并通过ELISA、Western blot、免疫荧光等方法进行鉴定.结果 经间接ELISA测定,兔抗TgVP1-1及TgVP1-2的多克隆抗体效价均达1:128 000;Western blot结果显示两种多抗均能识别弓形虫天然蛋白中85 000左右条带,与TgVP1预测相对分子质量大小相符,且特异性较好;通过免疫荧光技术检测到两株多抗识别的蛋白均定位于细胞质中,与酸性钙体的分布相同.结论 采用人工合成多肽为免疫原所获得的兔抗TgVP1多克隆抗体效价高,特异性好,弓形虫TgVP1和酸性钙体的深入研究奠定了基础,同时也为弓形虫病的诊断提供了新的有效工具.
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dUTP焦磷酸酶在大肠癌细胞和组织中的差异表达
目的 验证dUTP焦磷酸酶(dUTPase)在人4种大肠癌细胞SW480,SW620,LoVo,SW1116和组织的差异表达.方法 RT-PCR检测人4种大肠癌细胞SW480,SW620,LoVo,SW1116中焦磷酸酶的mRNA表达水平,并通过检测该酶水解dUTP释放的焦磷酸(PPi)来测定这4种大肠癌细胞dUTPase的酶活性.免疫细胞和组织化学检测焦磷酸酶的蛋白表达差异.结果 dUTPase在SW620和LoVo细胞的mRNA水平和酶活性高于SW480和SW1116细胞.大肠癌SW620,LoVo细胞免疫化学dUTPase表达高于SW1116、SW480细胞.大肠增生性息肉和腺瘤性息肉dUTPase的表达低于大肠癌.结论 焦磷酸酶dUTPase在人4种大肠癌细胞和组织存在差异表达.
