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卵裂胚发育与染色体异常的关系
目的 探讨卵裂胚发育与染色体异常的关系.方法 2005年9月～2006年3月对需要行胚胎植入前遗传学诊断的7例病人.用13、18、21、X、Y五色染色体探针筛查这些病人种植前胚胎的非整倍体,同时分析胚胎发育与染色体异常的关系.结果 共对52个胚胎进行活检,51个胚胎有FISH诊断结果.随着胚胎碎片比例的增加,染色体正常胚胎的比例下降,胚胎的碎片比例与正常胚胎的比例呈密切负相关,(r=0.835,P<0.01);在8细胞胚胎、9细胞以上胚胎(含9细胞)、7细胞以下(含7细胞)胚胎中,正常的胚胎比例分别为55%、50%、30.4%,其中8细胞胚胎组显著高于7细胞以下胚胎组(P<0.05);在卵裂球数目为偶数的胚胎中,正常胚胎的比例为48.4%(15/31),高于卵裂球数目为奇数胚胎的35%(7/20),但无统计学意义(P>0.05).卵裂球大小均匀的胚胎中,正常胚胎所占比例为54.8%(17/31),显著高于卵裂球大小不均匀的胚胎的25%(5/25)(P<0.05);优质胚胎中,正常胚胎的比例为55.6%,显著高于非优质胚胎的29.2%(P<0.05).结论 在种植前胚胎中,染色体异常胚胎广泛存在;依据现有的形态学评估标准,可以选择部分染色体正常的胚胎,但是形态学评价方法存在一定的局限性.
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改良程序化慢冻提高活检人胚胎的冻存率
[目的]探讨及Jericho改良方案用于冷冻活检后胚胎的效能.[方法]将92个质量相对较好的废弃人胚胎随机分配到单纯冷冻组(n=30),胚胎活检后标准程序化慢冻组(n=32)及胚胎活检后Jericho改良程序化慢冻组(n=30).将活检后的胚胎继续培养6～10 h,3组胚胎同时进行冷冻.观察各组胚胎冷冻解冻后的冻存率及囊胚形成率.[结果]活检胚胎采用Jericho改良方案冷冻后,胚胎存活率、完整率及囊胚率分别为73%,40%和23%,较活检后标准冷冻组(16%,13%和3%)显著提高(P值分别<0.001,0.05,0.05),达到单纯冷冻组的水平(P均>0.05).[结论]采用Jericho改良方案冷冻活检人胚胎优于目前的标准化慢冻方案,Jericho方案冷冻后的胚胎具备良好的发育潜能.
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用13、18、21、X、Y五色探针检测植入前人胚非整倍体的实验研究
目的:建立同时将13、18、21、X、Y五色探针用于分析单个卵裂球的方法.方法:收集体外受精-胚胎移植治疗周期中受精第3天,不适宜移植和冷冻的正常受精胚胎11个、双精受精胚胎1个用于研究.用Tyrode's酸溶解这些胚胎的透明带后,用0.1%Tween-20/0.01 N HCI将卵裂球固定,用Vysis公司的MuhiVysion PGT FISH探针(含有13、18、21、X、Y五种染色体探针)进行分析.结果:12个胚胎共有46个卵裂球,有核的卵裂球43个,其中有3个卵裂球各有2个核,共有46个细胞核.成功固定45个核,固定成功率为97.8%.43个核有杂交信号,杂交率为95.6%.11个单精受精胚胎共有39个核有信号,都为二倍体胚胎,其中正常胚胎2个.在9个异常胚胎中,嵌合型胚胎6个,异常非嵌合型胚胎2个,无规律分离型1个.结论:种植前胚胎中,染色体异常胚胎广泛存在.非整倍体胚胎占染色体异常胚胎的绝大多数,嵌合型是非整倍体的主要形式,形成非整倍体的主要原因可能是减数分裂过程中染色体丢失.
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胚胎种植前诊断中胚胎活检的动物实验研究
目的:以小鼠胚胎为材料进行种植前遗传学诊断(preimplantation genetic diagnosis,PGD)胚胎活检(Biopsy)的临床前研究.方法:通过输卵管冲洗,获得4～8细胞期胚胎,用机械法分别对4、8细胞的胚胎进行活检,然后继续培养,观察其囊胚形成及孵出情况并进行比较.结果:活检胚胎的囊胚形成率(4细胞期78.8%,n=66;8细胞99.0%,n=100)、囊胚孵出率(4细胞期84.6%,n=52;8细胞94.9%,n=99)与未活检对照组比较差异无显著意义(P＞0.05).结论:在小鼠胚胎4细胞或8细胞期进行单个卵裂球活检,不影响胚胎的进一步发育.机械法是一种较好的胚胎活检方法.
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五色荧光原位杂交技术的建立以及在种植前诊断中的应用探索
目的:建立五色荧光原位杂交技术在外周血、羊水及单个胚胎细胞样本中的实验方法,探索其在种植前诊断中的应用.方法:取外周血淋巴细胞、羊水细胞和不适于胚胎移植及冷藏的受精胚胎细胞分别制片,用五色荧光标记的探针进行原位杂交,用荧光显微镜观察.结果:获得稳定可行的各类标本的实验方法.结论:应用五色荧光原位杂交技术可对染色体进行快速准确的诊断,并可应用于产前诊断和胚胎种植前诊断.
