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大剂量葡萄糖诱导人视网膜内皮细胞凋亡的实验研究
目的检验大剂量葡萄糖水平对培养的原代人视网膜毛细血管内皮细胞(human retinal capillary endothelial cells,HRCEC)的直接影响.方法HRCEC细胞从捐赠人眼中分离得到.细胞在含有5 mmol/L或25 mmol/L葡萄糖的培养基中培养6 d.应用锥虫蓝染色测定细胞活力、流式细胞计数分析细胞周期、TUNEL分析细胞凋亡.结果HRCEC细胞在25mmol/L葡萄糖中培养6 d,细胞活力显著下降.通过流式细胞计数和TUNEL测定,凋亡细胞的数目在大剂量葡萄糖培养基中显著升高.结论大剂量葡萄糖可诱导人视网膜毛细血管内皮细胞凋亡,这有可能是促进糖尿病性视网膜病发展的原因.
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血清脂质运载蛋白2在小鼠视网膜血管内皮细胞血管生成中的作用
目的:观察脂质运载蛋白2(lipocalin-2,LCN-2)对体外培养的小鼠视网膜内皮细胞(retinal vascular endothelial cells,RVECs)增殖、迁移和管腔形成的影响及其在视网膜新生血管中的作用.方法:取生长状况良好的RVECs分为不同浓度组:分别以0、5、10μmol/L LCN-2作用细胞48h.采用EdU法检测细胞增殖,Transwell法检测细胞迁移,Matrigel法检测管腔形成.结果:不同浓度LCN-2作用的细胞增殖率大于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),不同浓度LCN-2组RVECs细胞迁移数目多于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),不同浓度LCN-2组细胞管腔形成数明显多于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),且细胞增殖、迁移和管腔形成均随着LCN-2浓度的升高而增加.结论:LCN-2能够明显促进RVECs的血管生成过程,提示LCN-2是一种重要的促视网膜新生血管形成的因子.
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Ang-1对高糖环境中猴脉络膜-视网膜内皮细胞单层通透性的影响
目的:利用猴脉络膜一视网膜内皮细胞建立内皮细胞(EC)单层模型,观察高浓度葡萄糖及血管生成素-1(Ang-1)对该模型通透性的影响.方法:待EC于孔径0.8μm的聚碳酸酯微孔滤膜上形成致密单层后分3组进行培养:对照组(DMEM培养基含25 mmol/L葡萄糖)、高糖组(DMEM培养基含30 mmol/L葡萄糖)、Ang-高糖组(DMEM培养基含30mmol/L葡萄糖+0.25 mg/L Ang-1).于1,3,5,7 d 4个时间点,以含白蛋白1 g/L的D-Hanks液灌注滤膜,检测蛋白质渗透压反射系数(8)及滤过系数(K,);并于5d和7d利用琼脂糖凝胶电泳检测DNA ladder.结果:3,5,7 d时,高糖组EC单层的通透性高于对照组(P<0.01);Ang-高糖组与对照组之间Ec单层的通透性无差异(P>.05).高糖组Ec的琼脂糖凝胶电泳在5d及7d均出现DNA ladder,对照组及Ang-高糖组未见DNA ladder.结论:高糖能够促进细胞凋亡,增加Ec单层通透性;Ang-1能抑制EC的凋亡,对抗高糖所致的Ec单层通透性增高.
