您当前的位置：
首页 > 文献资料
所属专业：
病毒滴度测定法文献资料
-
经典方法与LaSRT法测定绿色荧光蛋白标记重组病毒滴度的研究
目的以带有绿色荧光蛋白(GFP)标记基因的重组逆转录病毒为例,对经典方法与批量快速病毒滴度法(LaSRT)测定病毒滴度进行比较研究.方法(1)经典方法:于6孔培养板分别接种NIH3T3细胞2×105/孔,培养12 h后分别以0.5 m1、50μl和5μl带有GFP标记基因的病毒感染,聚凝胺终浓度为8μg/ml,48 h后以流式细胞仪检测细胞eGFP+率.病毒滴度(TU/m1)=(2×105×细胞eGFP+率)/病毒原液体积.(2)LaSRT法:NIH3T3细胞以5000/孔接种于96孔板,12 h后更换成完全培养液90μl/孔,以8孔为一组,第1孔中加入病毒液10μl,此后每孔依次10:1倍比稀释,聚凝胺终浓度为8 μg/ml,48 h后以浓度自高到低的方向,在荧光倒置显微镜下确定计量孔(第n孔),计数孔中的阳性细胞数m.病毒滴度(TU/m1)=m×10n+1.(3)对7批病毒以LaSRT法研究,探讨冻存/复苏过程对重组病毒滴度的影响.结果经典方法测定的重组病毒滴度为(1.54±0.38)×106TU/ml,LaSRT法测定的病毒滴度为(1.33±0.57)×106TU/ml,两者无统计学差异(P＞0.05).LaSRT法可以大批量、快速地测定以GFP为标记基因的重组病毒滴度.单次冻存/复苏后的病毒滴度为冻存前的(18.1±9.9)%(n=7).结论LaSRT法和经典方法测定以GFP为标记基因的重组病毒滴度,结果无统计学差异;LaSRT法获得结果简便、快速、经济,适合基因治疗的基础和临床研究.
