您当前的位置：
首页 > 文献资料
所属专业：
曲细精管微注射文献资料
-
用曲细精管微注射法建立绿色荧光蛋白转基因小鼠
目的研究曲细精管微注射法建立转基因小鼠的可行性.方法选取人巨细胞病毒启动子调控的增强型绿色荧光蛋白(pCMV-EGFP)表达载体,应用体视解剖镜和显微注射仪将不同剂量的被脂质体包裹的质粒DNA注射到不同年龄的KM小鼠曲细精管内.在注射后40 d左右,雄鼠与雌鼠合笼交配;分娩后3周,剪取仔鼠尾,提取基因组DNA,应用PCR、Southem blotting技术进行整合检测.处死2只首建小鼠,荧光显微镜观察组织冰冻切片中EGFP的表达.结果共注射41只雄性小鼠,存活34只,其中32只具有交配、受精能力,获得仔鼠382只.仔鼠经检测,PCR阳性133只,Southem blotting阳性15只.小鼠的年龄、注射剂量与EGFP的整合率没有明显关系,荧光显微镜观察下没有观察到组织冰冻切片中EGFP明显表达.结论曲细精管微注射法是动物基因转移的一条简便可行的新途径.
