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Smurf在肝纤维化中的表达及其对TGF-β/Smad信号传导的影响
目的 探讨Smurf泛素化机制对肝纤维化发生、发展的影响,为抗纤维化靶向治疗开辟一条新途径.方法 将对数生长期一定密度的肝星状细胞(HSC),按实验分组.A组:DMEM培养液+HSC细胞+转化生长因子-β(TGF-β)(浓度为0 ng/mL);B组:DMEM培养液+HSC细胞+TGF-β(浓度为1 ng/mL);C组:DMEM培养液+HSC细胞+TGF-β(浓度为2.5 ng/mL);D组:DMEM培养液+HSC细胞+TGF-β(浓度为5ng/mL);E组:DMEM培养液+HSC细胞+TGF-β(浓度为10 ng/mL);F组:DMEM培养液+HSC细胞+TGF-β(浓度为5 ng/mL)+硼替佐米40 ng/mL.各组细胞均接种在24孔培养板,依次加入不同浓度TGF-β,并以蛋白酶体抑制剂硼替佐米作为阻断剂,探讨Smurf在肝纤维化中的作用,培养一段时间后采用免疫组化方法检测Smurf1、Smurf2、Smad7的表达及α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达,RT-PCR检测胶原的表达,TGF-β的浓度梯度为0、1、2.5、5、10 ng/mL.每组均设3个复孔,并至少重复2次以上.结果 与A组相比,免疫组化结果显示,随着TGF-β浓度的增加Smurf1、Smurf2在HSC细胞中表达上调(P＜0.05);与A组比较,随着TGF-β浓度的增加Smad7蛋白在HSC中表达下调(P＜0.05);加入硼替佐米40 ng/mL后,Smurf1、Smurf2的表达没有显著变化(P ＞0.05),而Smad7的低表达受到明显抑制(P＜0.05);加入硼替佐米后胶原的生成受到抑制.结论 Smurf泛素化机制可能通过介导TGF-β/Smad信号通路的正向调控对刺激HSC分泌细胞外基质起到一定促进作用.
关键词： 肝星状细胞 细胞外基质 TGF-β/Smad信号转导通路 -
阿魏酸联合脂肪间充质干细胞调节TGF-β/Smad信号转导通路对肝星状细胞凋亡的影响研究
目的 探讨阿魏酸(FA)联用大鼠脂肪间充质干细胞(ADMSCs)调节TGF-β/Smad信号转导通路对肝星状细胞(HSCs)凋亡的影响.方法 实验将HSCs分为4组:空白组、FA组、ADMSCs组、FA+ADMSCs组.流式细胞术检测各组HSCs的凋亡率;qRT-PCR检测HSCs中TGF-β1、Smad2、Smad3和Smad7 mRNA的表达水平;Western blot检测HSCs中TGF-β1和Smad7蛋白、Smad2/3磷酸化(p-Smad2/3)表达变化.结果 与其他3组比较,FA+ ADMSCs中HSCs凋亡率明显升高(P＜0.05);TGF-β1、Smad2、Smad3 mRNA表达明显下降,Smad7 mRNA表达明显升高(P＜0.05);TGF-β1蛋白、p-Smad2/3表达明显降低,而Smad7蛋白表达明显升高(P＜0.05).结论 FA能增强ADMSCs对HSCs中TGF-β1表达的下调作用,进而导致下游p-Smad2/3活性下降及Smad7表达升高,从而参与促进细胞凋亡.
关键词： 阿魏酸 脂肪间充质干细胞 肝星状细胞 细胞凋亡 TGF-β/Smad信号转导通路
