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外源性线粒体融合素基因-2转染对肝癌细胞体外生物学行为的影响
目的:研究外源性线粒体融合素基因-2(mitofusin-2 gene,mfn2)对肝癌细胞株HepG2体外生物学行为的影响.方法:基因重组构建并鉴定mfn2真核表达质粒pEGFPmfn2,用脂质体将质粒转染培养人肝癌细胞株HepG2,经G418筛选阳性细胞克隆,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测转染后细胞mfn2 mRNA的表达水平,Westem-blot检测线粒体融合蛋白的表达,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测mfn2对HepG2细胞增殖的影响,Annexin-V/PI双标流式细胞术检测转染细胞凋亡的变化.结果:重组真核表达质粒pEGFPmfn2经限制性内切酶双酶切,电泳后显示约2 300 bp的mfn2片段和4 700 bp的pEGFP-N2栽体片段.RT-PCR及Western-blot显示转染pEGFPmfn2组有nffn2基因mRNA及其蛋白表达.MTT实验提示转染mfn2基因后,HepG2细胞增殖受到抑制;流式细胞分析显示转染pEGFPmfn2组与转染pEGFP组和空白对照组相比可促进细胞凋亡.结论:成功构建了pEGFPmfn2真核表达质粒,外源性mfn2基因可抑制肝癌细胞的增殖,并可诱导肝癌细胞凋亡.
