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3种核酸提取方法检测甲型H1N1流感病毒的比较
目的 选择常见的3种核酸提取方法,比较其对低拷贝数甲型H1N1流感病毒核酸检测的敏感性差异,为实验室应用和结果的评价提供依据.方法 对已确定阳性的甲型H1N1流感病毒标本,作10-1～10-4系列稀释,选用Promega公司全自动核酸提取仪及配套试剂盒、QIAGEN公司Rneasy Mini Kit和国产H公司提取试剂盒3种核酸提取方法提取上述标本核酸模板,采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(荧光RT-PCR)对其进行评价.结果 在对不同拷贝数流感病毒的检测中,3种核酸提取方法以Promega公司全自动核酸提取仪提取效率高,以此提取效率作为100%,则QIAGEN Rneasy Mini Kit和国产H公司提取试剂盒的平均提取效率依次为83.27%、55.70%.经方差分析,3种方法之间存在显著性差异(P<0.05).结论 各试剂之间提取核酸的效率存在显著差异,建议根据实际情况采用合适的核酸提取试剂和方法.
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血液混样HCV/HIV-1 RNA全自动提取方法的应用评价
目的:建立献血者全自动核酸检测方法,探讨在我国血液筛查中引进全自动核酸筛查的可行性.方法:选用STAR2000加样仪进行血样汇集(24人份),在COBAS AMPLICOR进行扩增和检测分析结果,从灵敏度及抗干扰能力方面进行评价.结果:用国际标准核酸质控品考评及常规应用,表明全自动汇集、全自动核酸提取及扩增和检测95%的检出限量HCV RNA和HIV-1 RNA分别为17.4 IU/ml和20.6 cp/ml,20mg/ml胆红素、1g/dl血色素及中等程度的脂血对结果元影响.通过对16 512个样本共688汇集池分析,HCV RNA阳性1例(ELISA亦阳性),HIV-1 RNA未检出阳性.结论:血液混样MPLC全自动核酸提取方法可应用于血液HCVRNA和HIV-1 RNA的筛查工作.
