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荧光定量PCR检测HCV RNA的测量不确定度评定与应用分析
目的：分析研究荧光定量PCR(FQ-PCR)测定HCV RNA的测定不确定度，并进行评定及应用分析。方法：FQ-PCR 分析仪选取2个 RNA 结果呈现阳性的临床样本，分别重复测定10次，对测定 HCV RNA 测量整个过程分析，确定以及简化测定不确定度的来源，采取不确定度A类评定法和B类评定法，确定合成以及扩展不确定度。结果：其来源包括有批内重复性、湿度时间、方法偏倚、批间重复性以及消毒之前和以后等相关原因。其各个分量当中，由湿度时间造成不确定比例大，然而批间重复性试验小。结论：利用FQ-PCR测定HCV RNA测量不确定度的临床研究，对各个实验室检查结果表现趋于一致具有重要意义，能够使来自不同临床实验室的检查结果具有可比性。
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69例慢性丙型肝炎患者基因型与肝功能指标、HCV RNA及中医证型的相关性分析
目的 探讨慢性丙型肝炎(chronic hepatitis C,CHC)患者基因型与患者一般情况、肝功能指标、HCV RNA载量及中医证型的关系.方法 采用前瞻性病例研究及流行病学调查方法,收集69例抗HCV阳性及HCV RNA＞ 1000IU/mlCHC患者的一般情况、肝功能、HCV RNA载量、HCV基因型及中医症状等临床资料,并通过高级职称中医医师对所有患者进行辨证分型.采用SPSS 11.5统计软件的t检验和x2检验分析HCV基因型与上述各项数据的相关性.结果 69例患者中HCV1b型52例(75.4％),2a型17例(24.6％).69例HCV单基因型患者的基因型与年龄、肝功能指标、中医证型比较差异无统计学意义(P＞0.05),与性别、血清HCV-RNA载量比较差异有统计学意义(P＜0.05),其中男性多见1b型,女性多见2a型；1b型HCV RNA载量高于2a型.结论 慢性丙型肝炎病毒感染以1b型为主,HCV基因型与性别、HCV-RNA载量关系密切,与年龄、肝功能、中医证型无明显相关性.
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静脉吸毒人群MBL2与HCV感染相关性研究
目的 研究静脉吸毒人群甘露糖结合凝集素MBL2变异对丙型肝炎病毒(HCV)感染的影响. 方法 选取 2016年湖南省白泥湖强制隔离戒毒所HCV阳性静脉注射吸毒者453例,健康对照453例,抽取外周静脉血,进行HCV检测及MBL-2基因型检测,分析MBL2的15种单核苷酸多态性基因型及其HCV感染的相关性,比较吸毒人群和健康人群的基因型差异. 结果 453例HCV 阳性静脉注射吸毒者中109例HCV 抗体阳性,HCV RNA 阴性;344例 HCV抗体和RNA皆阳性.导致MBL缺乏的遗传变异和HCV RNA的存在两者之间无显著相关性.与健康人群相比导致MBL缺乏的MBL2-289X启动子基因型在HCV RNA阴性吸毒人群中呈过度表达(OR=1.65,95％ CI 1.05- 2.58). 结论 导致MBL缺乏遗传变异和HCV RNA的存在无关联.吸毒者中MBL2-289X与HCV RNA有关联,但尚需进一步验证.
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血清唾液尿液HCV RNA定量检测与分析
丙型肝炎病毒(HCV)感染常引起慢性活动性肝炎并导致肝纤维化,在患病早期使用IFNa有一定疗效.过去丙型肝炎的检测主要靠转氨酶和Anti-HCV的测定,而血清中HCV RNA才是病毒复制和肝炎进程的更确切的标准.因此定量PCR检测HCV RNA为HCV感染及其疗效的判定提供了一项重要指标.本室采用定量PCR法,对120例患者同时检测血清唾液尿液中HCV RNA的含量报道如下.
关键词： 丙型肝炎病毒(HCV) 肝纤维化 HCV RNA -
徐州地区丙型肝炎病毒基因分型研究
目的：了解徐州地区丙型肝炎病毒（HCV）的基因型构成状况，分析HCV不同基因型感染患者之间肝功能以及病毒载量是否存在差异。方法对116例抗-HCV及HCV RNA阳性的患者，采用实时荧光PCR产物测序法检测HCV基因分型；同时检测血清肝功能的丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）和总胆红素（TBil），采用荧光定量PCR方法检测血清HCV RNA水平。结果116例患者共检测出8种基因型，主要为1型63例（54.31%），其中1a型1例，1b型61例，1c型1例；2型48例（41.38%），其中2a型40例，2i型8例；3型（3a）1例（0.86%）；6型4例（3.45%），6a型1例，6h型3例。1型、2型和6型患者之间的肝功能以及病毒载量，显示各型之间差异无统计学意义（P均＞0.05）。结论徐州地区HCV感染以基因1、2型为主，也存在一定数量的6型和3型；不同基因型HCV感染者肝功能及病毒载量差异无统计学意义。
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南京地区218例丙型肝炎患者HCV基因分型
目的 了解南京地区丙型肝炎病毒(HCV)基因型的分布特点.方法 收集218份抗-HCV阳性和HCV RNA阳性的血清标本,通过基因芯片法进行基因分型研究.结果 218例HCV感染者血清中,检出1b、2a、3a、3b、6型单基因型(分别为8.72%、2.29%、5.50%和1.83%)和1b+2a、1b+3b、1b+6型、2a+3a混合基因型共9种,其中以1b型为主,占77.06%.结论 1b型为南京地区丙型肝炎患者感染HCV的主要基因型,2a、3a、3b、6型亦占相当比例,提示南京地区HCV流行的基因型呈现多样性.
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血液及血制品感染因子检测
目的了解1997～1999年度我市临床使用的血液及血液制品中甲肝病毒(HAV)、乙肝病毒(HBV)、丙肝病毒(HCV)、艾滋病病毒(HIV)及梅毒螺旋体的感染情况.方法用ELISA、PCR和TRUST对171份血液、83份血制品检测了抗-HAV IgM、HBsAg、抗-HCV、HCV RNA、抗-HIV1+2、TRUST、TPPA.结果 171份血液标本抗-HAV IgM、抗-HCV、抗-HIV1+2皆阴性;HBsAg阳性1例(0.058%),梅毒1例(0.058%);83份血制品抗-HAV IgM、HBsAg、抗-HIV1+2、TRUST均阴性,抗-HCV阳性率为24.1%,均为人血丙种球蛋白,取4个批号阳性的各2份进行HCV-RNA检测,结果6份HCV RNA阳性.结论 1997～1999年度临床上所使用的血液及血制品(人血丙种球蛋白)仍存在残余危险,需采取措施减少残余危险度.
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CD4＋CD25＋Treg细胞对慢性丙型病毒性肝炎患者干扰素治疗疗效预判作用研究
目的：探讨CD4＋CD25＋Treg细胞在慢性丙型病毒性肝炎（ chronic hepatitis C，CHC）患者干扰素治疗过程中的疗效判断作用。方法选取2013年10月至2014年8月收治的150例CHC患者，利用流式细胞术计数患者外周血CD4＋CD25＋Treg细胞的数量，使用实时荧光PCR检测HCV RNA含量。随访观察患者在α干扰素和利巴韦林治疗前和治疗24周后的CD4＋CD25＋Treg细胞和HCV RNA的变化情况。根据HCV RNA载量情况分为低载量组、中载量组和高载量组；根据治疗前后HCV RNA的变化情况分为转阴组、慢反应组和不反应组。结果 CHC患者性别和年龄在不同HCV RNA载量无统计学差异，而HCV RNA载量与CHC患者外周血CD4＋CD25＋Treg细胞量间差异显著，两者呈正相关（r＝0．996，P＝0．005）。同时，CHC患者经α干扰素和利巴韦林治疗24周后，转阴组外周血CD4＋CD25＋Treg细胞水平从（8．41±2．08）％降至（3．96±1．94）％（P＜0．001），慢反应组细胞水平从（8．26±2．59）％降至（5．92±2．35）％（P＜0．001），具有统计学意义；而不反应组外周血CD4＋CD25＋Treg细胞水平反而升高，从（8．61±2．31）％升至（10．42±2．18）％（P＜0．001），具有统计学意义。结论 CHC患者HCV RNA载量与其外周血CD4＋CD25＋Treg细胞量呈正相关。经α干扰素和利巴韦林治疗24周后，外周血CD4＋CD25＋Treg细胞随着HCV RNA的降低而降低，而HCV RNA经治疗降低无效时，CD4＋CD25＋Treg细胞反而会升高。提示CD4＋CD25＋Treg细胞可能参与丙型肝炎的进展，为研究丙型肝炎患者的治疗是否有效提供了新的思路。
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内标实时荧光定量PCR技术在HCVRNA定量检测中的应用分析
目的 比较内标实时荧光定量PCR技术及国产实时荧光定量PCR法检测HCV RNA载量的检测结果,研究两种检测方法的灵敏度.方法 采集丙肝患者抗病毒治疗前28例、治疗4周29例及治疗结束时29例患者外周血标本,分别用内标实时荧光定量PCR技术(COMBAS Taqman全自动分析系统)及国产实时荧光定量PCR法检测同一血清其HCVRNA定量值.结果 内标实时荧光定量PCR技术低检出下限是15IU/mL,抗病毒治疗前28例患者两种方法检测结果差异无统计学意义(P＞0.05)；抗病毒治疗4周时29例患者病毒载量经内标实时荧光定量PCR技术检测产生RVR的百分比是24.14％,而国产实时荧光定量PCR法产生RVR的百分比是检测79.31％,差异有统计学意义(x2=16.39,P＜0.01)；抗病毒治疗结束时29例患者HCVRNA载量经内标实时荧光PCR法检测阳性率为20.69％,而国产实时荧光定量PCR法检测阳性率为3.45％.结论 内标实时荧光定量PCR技术较国产实时荧光定量PCR法检测HCVRNA载量灵敏,能够提供更精确的数据.
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HCV及其与HBV重叠感染患者血清HCV RNA检测的临床意义
目的 探讨HCV及其与HBV重叠感染患者血清HCV RNA检测的临床意义.方法 收集我院HCV感染及其与HBV重叠患者血清标本共179例,分为慢性丙型肝炎组(n = 101)、肝硬化组(n = 45)和肝癌组(n = 33).采用ELISA法检测血清抗HCV,用荧光定量PCR检测HCV RNA;对重叠感染HCV和HBV的31例患者同时检测HBV DNA.结果 179例患者抗HCV的总阳性率为97.8%,高于HCV RNA的阳性率(69.8%)(P ＜ 0.01).肝硬化组和肝癌组HCV RNA的阳性率分别为82.2%和84.8%,高于慢性丙型肝炎组阳性率64.4%(P ＜ 0.05).HCV与HBV重叠感染组的HCV RNA的阳性率为48.4%,低于单纯HCV感染组的HCV RNA阳性率(71.6%)(P ＜ 0.05).HCV与HBV重叠感染患者的HBV DNA阳性率为35.5%,也显著低于单纯HBV感染患者阳性率(76.7%)(P ＜ 0.01).HCV RNA阳性组ALT异常率(60.8%)高于HCV RNA阴性组(35.2%)(P ＜ 0.05).结论对HCV感染相关的不同疾病患者联合检测抗HCV、HCV RNA和ALT,对于HCV和HBV重叠感染者同时检测HBV DNA,有利于疾病的明确诊断、病情观察及预后判断.
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微量离心柱法检测HCV RNA对原发性肝癌的预测价值
目的：通过微量离心柱法检测不同丙型肝炎病毒（HCV）感染患者血清HCV RNA水平，以探讨血清HCV RNA水平在不同感染患者中的差异及其预测原发性肝癌的临床意义。方法选取本院2011年5月至2015年11月收治的HCV感染的原发性肝癌患者51例、肝硬化和慢性重度肝炎患者65例和慢性轻度肝炎患者83例为研究对象，采用微量离心柱法分离纯化血清HCV RNA，并采用荧光定量聚合酶链式反应（PCR）检测RNA水平，同时采用化学发光法检测患者血清甲胎蛋白（AFP）水平，分析HCV RNA与AFP的相关性。结果 HCV感染患者血清HCV RNA水平依次为：原发性肝癌组＜肝硬化和慢性重度肝炎组＜慢性轻度肝炎组，AFP水平依次为：原发性肝癌组＞肝硬化和慢性重度肝炎组＞慢性轻度肝炎组。进一步相关性分析提示血清AFP水平与HCV RNA水平呈显著负相关（P＜0.05）。肝硬化和慢性重度肝炎组中存在部分高AFP水平和低HCV RNA水平患者。结论高AFP水平和低HCV RNA水平可能是原发性肝癌的重要临床生物学特征，对于预测易患原发性肝癌的高危患者具有一定的临床价值，但尚待进一步长期随访证实。
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不同HCV相关疾病患者血清抗HCV和HCV RNA检测的比较研究
目的：：探讨不同HCV感染疾病患者血清抗HCV和HCV RNA的阳性率,以指导临床诊治相应疾病。方法：收集我院HCV感染患者血清标本共165例,采用ELISA法检测血清抗HCV,利用实时荧光定量PCR技术检测HCV RNA。结果：165例HCV感染患者血清抗HCV总阳性率为97.6%,高于HCV RNA阳性率(72.7%)(P<0.05)。肝硬化组和肝癌组HCV RNA阳性率分别为80.9%和82.9%,高于慢性丙型肝炎组阳性率(63.9%)(P<0.05)。结论：联合检测抗HCV和HCV RNA,有助于HCV感染相关疾病的临床诊断、疗效观察及预后判断。
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口腔器械常规消毒后HCV RNA污染状况分析
由于在口腔诊疗过程中,患者的唾液、创口血液、分泌物经过各种医疗器械、材料造成交叉感染.为了解医疗器械HCV RNA污染状况,以便采取有效的控制措施,我们PCR技术对6种常用口腔器械进行了HCVRNA检测.
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3种丙肝病毒检测方法在丙型肝炎诊断和疗效监测中的临床价值
目的：探讨HCV－cAg、HCV－Ab和HCV RNA在丙型肝炎诊疗中的临床价值，并分析HCV－cAg和HCV RNA的相关性。方法采用ELISA法和RT－PCR法检测221例疑似丙肝患者血清HCV－cAg、HCV－Ab和HCV RNA含量。结果单个方法检测时其阳性率分别为HCV RNA 47．5％、HCV－cAg 48．4％、HCV－Ab 84．1％，联合检测时其阳性率分别为HCV－Ab＋HCV－cAg 98．2％、HCV－Ab＋HCV RNA 97．7％；HCV－cAg检测的敏感性为91．4％，特异性为90．5％，且与HCV RNA的相关系数r＝0．997；当HCV－cAg的S／CO≥3时，与HCV RNA阳性的符合率为98．8％。结论 HCV－Ab联合HCV－cAg或者HCV RNA检测比单项检测阳性率更高（P均＜0．05），可防止窗口期丙肝患者漏诊；HCV－cAg出现早且和HCV RNA的相关性高，可用于窗口期丙肝患者的筛查和疗效监测，但是不可以作为停药治疗的指标，当其S／CO≥3时可作为判断丙肝感染较可靠的指标。
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丙肝患者病毒载量及危险因素与配偶感染关系
目的研究慢性丙型肝炎(CHC)患者外周血浆病毒载体量、危险因素与其配偶感染的关系.方法应用酶免法(EIA)及FQ-PCR法检测122例CHC患者的血浆、尿液、泪液和精液及其配偶血浆抗丙型肝炎病毒(抗-HCV)及HCVRNA含量.结果CHC患者血浆、尿液、泪液和精液及其配偶血浆抗-HCV检出率分别为94.26%(115/122),42.8%(21/49),11.19%/(5/42),47.22%(17/35)阳22.50%(27/120);HCVRNA的检出率分别为88.15%(67/122),55.10%(27/49),19.04%(8/42),66.67%(24/36)和25.83%(31/120),对照组均无抗-HCV及HCVRNA检出.男性配偶的抗-HCV、HCVRNA的检出率分别为15.06%(11/73),78.08%(57/73);女性配偶的抗-HCV、HCVRNA的检出率分别为29.78%(14/47)、89.36%(42/47).当CHC患者外周血浆HCVRNA≥10%opies/ml时,其配偶HCVRNA的检出率为29.1%(21/69);当CHC患者外周血浆HCVRNA＜105copies/ml时,其配偶HCVRNA的检出率为19.47%(11/57).配偶婚龄＜10,11～20,21～30,31～54年的4个组HCVRNA的检出率分别为13.33%(2/15)、22.22%(4/18)、32.00%(8/25)和55.32%(27/47).结论HCV可在配偶间传播.CHC患者的女性配偶HCV感染高于男性配偶.CHC患者外周血浆病毒载体量HCVRNA≥105copies/ml时,其配偶的感染危险性高于血浆HCVRNA＜105copies/ml的CHC患者的配偶(P＜0.05).配偶HCV感染率与婚龄成正比.
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HIV/HCV重叠感染患者肝脏功能进展原因分析
探讨HIV/HCV重叠感染患者肝脏功能进展的原因.回顾性比较HIV/HCV重叠感染患者和单独HCV感染患者两组的肝脏功能、病理情况、感染时间、免疫功能及综合分析HCVRNA定性检测与HCV抗体检测在两组中的异同.HIV/HCV重叠感染患者中肝功异常者占58.5%,HCV感染组为85.5%,肝功损伤程度亦较后者轻微(P<0.05);两组患者在肝脏病理炎症活动和纤维化程度方面差异无显著性(P=0.187,0.954);而重叠感染患者进展到肝功能异常的时间较单独HCV感染者提前8年(P<0.001);免疫功能方面(CD+4T、C+8T)重叠感染者组与单独HCV感染者组比较,差异非常显著(P<0.001;P<0.001);HCVRNA(+)同时HCV抗体(+)的人数与HCVRNA(+)同时HCV抗体(-)的人数比较在重叠感染组为52:9例,在HCV感染组44:1例,两组间差异显著P=0.043.HIV/HCV重叠感染可加速丙型病毒性肝炎的进展,可能与HIV对机体的细胞免疫、体液免疫影响有关.
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慢性丙型肝炎中医证型与HCV 1b亚型NS5A aa变异、IL28B SNP的关系
目的 分析慢性丙型肝炎(CHC)中医证型与患者一般情况、肝功能、HCV RNA、NS5A aa变异及IL28BSNP的关系.方法 通过回顾性研究,收集58例CHC患者的一般临床资料、血生化(ALT、AST、ALB、GLO、TBIL)、HCV RNA、NS5A aa变异及IL28B SNP,Spss 19.0软件分析各数据与中医证型的相关性.结果 58例CHC中医证型中,正虚邪恋型多(43.1％),中医证型与年龄和球蛋白有关(P＜0.05),肝郁脾虚型多见于年轻患者,瘀血阻络型和肝肾阴虚型多见于中老年患者.中医证型与HCV RNA、NS5A aa变异及IL28B SNP无统计学意义(P＞0.05).结论 CHC中医证型中,正虚邪恋型多,中医证型与年龄和球蛋白有关,与HCV RNA、NS5A aa变异以及IL28B SNP无关.
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HIV感染对HCV肝损害病毒水平和基因分型的影响
目的:了解HIV感染者合并HCV 感染后导致的丙型肝炎比单纯感染HCV时,在肝功能、病毒水平以及基因分型方面的影响及意义.方法:HCV DNA定量检测采用荧光实时聚合酶链反应(PCR)法,丙型肝炎患者基因分型检测采用RT-PCR体外扩增法结合DNA反向点杂交技术检测.结果:40例HIV/HCV感染者的肝损害程度及病毒水平明显高于单纯HCV感染者水平,而在基因分型方面比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论:HIV/HCV 混合感染加速了肝脏病度,提高了HCV 病毒水平.HIV/HCV 混合感染对丙型肝炎病毒基因分型无影响.
关键词： HIV/HCV混合感染 HCV RNA HCV基因分型 -
联合检测维持性血液透析患者丙型病毒性肝炎感染标志的意义
目的:探讨维持性血液透析患者丙型病毒性肝炎感染标志联合检测的意义.方法:收集120例血透患者的临床资料,采用第2代ELISA法检测血抗-HCV.RT-PCR方法检测HCV RNA,比较维持性血液透析患者丙型肝炎病毒感染标志联合检测的意义.结果:120例血透患者中,抗HCVIgM阳性49例(40.8%),抗HCVIgG阳性47例(39.2%),HCVRNA阳性52例(43.3%),所有HCV指标均阳性37例(30.8%),至少1项指标阳性55例(45.8%).结论:联合检测抗HCVIgM、抗HCVIgG和HCV RNA可显著提高血透患者HCV感染的检出率.
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丙型肝炎病毒的检测与临床应用
丙型肝炎病毒(HCV)感染导致的慢性丙型肝炎(CHC)在全球发病率较高.不同的HCV检测方法之间存在分析报告的敏感度、特异度的差异,尤其是HCVRNA定量检测.该文就HCV检测技术的进展及其在临床应用的现状作一综述,以帮助临床医师选取高灵敏度的检测方法,提高HCV RNA检测结果的准确性及安全性,对于患者的诊断和治疗非常重要.
