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分离外周血单个核细胞的条件优化
目的 比较不同抗凝剂、离心力及离心时间对葡聚糖—泛影葡胺(Ficoll)密度梯度离心法分离单个核细胞的影响,优化实验方案.方法 取肝素、EDTA及2种抗凝剂混合后的3种不同抗凝血,采用Ficoll法进行分离,用血细胞分析仪进行分类和计数,计算回收率和纯度;同时对EDTA抗凝血进行不同离心力及离心时间的处理,优化分离效果.结果 EDTA组获得PB-MC回收率为(51.32±50.21)％,纯度为(45.38±22.14)％;肝素组获得PBMC回收率为(24.52±19.10)％,纯度为(78.46±11.91)％;EDTA+肝素组获得PBMC回收率为(56.32±24.30)％,纯度为(80.27±1 2.44)％.经单因素方差分析,PBMC回收率方面,EDTA组与肝素组比较差异有统计学意义(P＜0.05),EDTA组回收率较高,而肝素+EDTA组与EDTA组回收率比较,差异无统计学意义(P＞0.05);PBMC纯度方面,EDTA组与肝素组比较差异有统计学意义(P＜0.05),肝素组PBMC纯度较高,而肝素+ EDTA组与肝素组比较,纯度则差异无统计学意义(P＞0.05);PBMC存活率方面,肝素+EDTA组与肝素组、EDTA组比较,均差异无统计学意义(P＞0.05).对EDTA抗凝血进行单个核细胞分离实验表明,在离心力为600×g(1 800 r/min),离心时间为25 min时分离效果佳.结论 肝素+EDTA组回收率、纯度与单种抗凝剂实验组相比,结果差异无统计学意义(P＞0.05),故在实验过程中可以混合两种抗凝全血进行细胞分离.EDTA抗凝血在离心力为600 g(1 800 r/min)、离心时间为25 min时,分离单个核细胞效果佳.
关键词： 单个核细胞 Ficoll连续密度梯度离心法 抗凝剂 分离效果
