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糖皮质激素对类风湿关节炎患者血清中B、T淋巴细胞弱化因子表达的影响
目的 探讨B、T淋巴细胞弱化因子(BTLA)在类风湿关节炎患者血清中的水平及其在发病机制中的作用和糖皮质激素对其表达的调节.方法 酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测患者血清中BTLA的水平.采用免疫印迹法检测抗核抗体(ANA)谱,ELISA法检测抗环瓜氨酸肽(CCP)抗体,免疫比浊法检测类风湿因子(RF).结果 对照组治疗有效例数为9例,无效为11例;观察组有效例数为15例,无效为12例.观察组临床治疗总有效率(75%)明显高于对照组(53%),差异有统计学意义(P<0.05).对照组治疗前血清中BTLA为(89±13)μg/L,治疗后为稍微升高,为(110±11)μg/L,差异有统计学意义(P<0.05);而观察组治疗前血清中BTLA为(78±11)μg/L,治疗后为(140±13)μg/L,明显升高.结论 BTLA在类风湿关节炎患者的血清中水平降低,糖皮质激素可上调其表达,BTLA的升高影响类风湿关节炎病情的转归,可作为治疗的新靶点.
关键词： 糖皮质激素类 关节炎 类风湿 B、T淋巴细胞弱化因子 -
BTLA介导的负调共刺激信号对小鼠心脏移植受体Treg的影响
目的 探讨人疱疹病毒侵入介导因子(HVEM)基因突变体腺病毒载体对小鼠心脏移植受体Treg(调节性T细胞)的影响.方法 HVEM基因突变体腺病毒载体转染心脏移植物,行颈部异位心脏移植后观察其对受体小鼠Treg数量和功能的影响,并检测该腺病毒对供受体混合淋巴细胞培养体系中IL6和TGF-β的影响.结果 HVEM突变体腺病毒载体转染心脏移植物后对移植受体Treg数量有增加,功能有增强的作用,移植物存活时间较对照组显著延长;该腺病毒处理供受体混合淋巴细胞培养体系后,培养上清液中IL-6的表达较对照组显著上调.结论 HVEM突变体腺病毒载体在延长小鼠心脏移植物存活同时提高受体Treg的数量,并显著上调了其相关细胞因子的表达,提示HVEM-BTLA通路通过干预受体Treg功能是延长移植物存活的可能机制.
关键词： 人疱疹病毒侵入介导因子 B、T淋巴细胞弱化因子 调节性T细胞 心脏移植 -
小鼠BTLA慢病毒表达载体的构建及鉴定
目的 构建小鼠BTLA慢病毒表达载体,并对表达产物进行鉴定.方法 以pET-28a-mBTLA质粒为模板,通过PCR技术构建pMD18-T-mBTLA质粒,将小鼠BTLA基因全长编码序列克隆到慢病毒转移载体,通过脂质体转染293T细胞包装成小鼠BTLA慢病毒颗粒.PCR技术和基因测序对重组质粒进行鉴定.荧光显微镜观察重组慢病毒感染293T细胞形态学变化.RT-PCR和Western blot法鉴定BTLA在重组慢病毒感染293T细胞中的表达.50％组织培养感染剂量法(TCID5o法)检测重组慢病毒滴度.结果 成功构建的pMD18-T-mBTLA质粒和pSL6-mBTLA质粒,经双酶切电泳后均出现大小约为1 kb的条带与mBTLA编码序列的大小相符.基因测序并比对分析进一步证实mBTLA编码序列成功整合到质粒载体.病毒上清PCR扩增和293T细胞形态学观察证实Lenti-mBTLA慢病毒包装成功.TCID50法测定Lenti-mBTLA慢病毒滴度为1.3×108 pfu/mL.RT-PCR和Western blot法证实Lenti-mBTLA慢病毒能有效表达mBTLA mRNA和蛋白质.结论 成功构建了表达小鼠BTLA的慢病毒.
关键词： 慢病毒 B、T淋巴细胞弱化因子 293T细胞 PCR技术 -
新风胶囊通过BTLA-HVEM诱导Treg免疫耐受改善膝骨关节炎大鼠心肺功能
目的:观察膝骨关节炎(KOA)大鼠心肺功能的变化及新风胶囊(XFC)对其影响,探讨可能的分子机制.方法:按随机数字表将40只大鼠随机分为正常对照(NC)组,模型对照(MC)组,氨基葡萄糖对照(GS)组,XFC组,每组10只.除NC组外,采用关节腔注射木瓜蛋白酶和L-半胱氨酸方法复制成KOA大鼠模型,造模后第14天开始给药.NC组及MC组均给予生理盐水,剂量为0.01 g/kg,其余2组分别给予GS、XFC混悬液,剂量分别为0.098 g/kg、0.375 g/kg.采用超声诊断仪检测大鼠心功能,动物肺功能仪检测大鼠肺功能,ELISA法检测BTLA、HVEM、IL-17、IL-4、TGF-β1；流式细胞术检测大鼠外周血CD4+ CD25+Treg、CD4+ CD25+Foxp3+ Treg的表达.结果:与NC组比较,MC组体质量、E、E/A、FVC、FEV1、FEF25、FEF50、FEF75、MMF、PEF,BTLA、HVEM、IL-4、CD4+ CD25+ Treg、CD4+ CD25+ Foxp3+Treg明显降低,TGF-β1、IL-17明显升高(P＜0.01或P＜0.05).与MC组比较,各组大鼠体质量,心功能参数E峰、E/A,肺功能参数FEV1、FEF5O、FEF75、PEF,BTLA、HVEM、IL-4、CD4+ CD25+ Treg、CD4+ CD25+ Foxp3+ Treg明显升高,关节软骨Mankin评分、心系数、肺系数、TGF-β1、IL-17明显降低(P＜0.01或P＜0.05)；与GS组相比,XFC组体质量、Treg升高为明显(P＜0.01或P＜O.05).结论:新风胶囊改善KOA大鼠关节软骨Mankin评分,改善其心肺功能,其机制可能是促进BTLA-HVEM负调共刺激信号作用,诱导Treg免疫耐受,上调IL-4表达,下调IL-17、TGF-β1表达,抑制异常免疫炎症反应.
关键词： 骨关节炎 心肺功能 B、T淋巴细胞弱化因子 调节T细胞 新风胶囊
