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反相高效液相色谱法测定原发性肝癌患者血浆中苏氨酸、丙氨酸对映体
目的：用反相高效液相色谱法探讨原发性肝癌患者L-苏氨酸（L-threonine ，L-Thr）、D-苏氨酸（D-threonine ，D-Thr）、L-丙氨酸（L-alanine ，L-Ala）和D-丙氨酸（D-alanine ，D-Ala）水平的变化。方法采用邻苯二甲醛和N-乙酰-L-半胱氨酸柱前衍生用反相色谱柱进行分离，流动相为20 mmol/L磷酸二氢钠溶液、乙腈梯度洗脱，流速1．0 mL/min ，激发波长350 nm ，发射波长450 nm。结果该方法可以同时分离测定血液中苏氨酸、丙氨酸氨基酸对映体，回归方程线性相关性良好，检测线分别为11．4 pg/mL、9．77 pg/mL、4．11 pg/mL和3．50 pg/mL ，回收率为90．22％～105．7％，日间、日内相对标准偏差（RSD）为1．04％～4．11％。结论该方法准确、灵敏、适用于临床和科研。
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反相高效液相色谱法同时测定肝癌相关酪氨酸、缬氨酸对映体
目的:建立柱前衍生反向高效液相色谱荧光检测法同时对肝癌相关L-酪氨酸(L-tyrosine,L-Tyr)、D-酪氨酸(D-tyrosine,D-Tyr)、L-缬氨酸(L-valine,L-Val)、D-缬氨酸(D-valine,D-Val)进行拆分测定.比较正常人与原发性肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)(以下简称原发性肝癌)患者血浆中酪氨酸与缬氨酸对映体含量的变化,考察它们与原发性肝癌的关系.方法:柱前衍生化试剂:邻苯二甲醛(O-phthaldialdehyde,OPA)和N-乙酰-L-半胱氨酸(N-acetyl-L-cysteine,NAC);色谱柱:菲罗门Gemini C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:20.0 mmol/L磷酸二氢钠(pH 6.8)-乙腈为流动相的梯度洗脱;荧光检测波长设定:激发波长(λex)为350 nm,发射波长(λem)为450 nm;流速1 ml/min;柱温30℃;进样量10μl.结果:4种物质的回收率在90.74％～ 106.80％之间,线性关系良好,检出限分别为6.79 pg/ml(L-Tyr),7.81 pg/ml(D-Tyr),1.86 pg/ml (L-Val),1.95 pg/ml(D-Val).利用该方法,对20名健康志愿者和23名HCC患者的血浆进行测定,统计分析结果表明,L-Tyr明显升高(P=0.011),L-Val(P=0.019)、D-Val(P=0.006)显著性降低,D-Tyr(P=0.973)无明显变化.结论:该方法准确、灵敏、重复性好,适用于实验室研究与临床检测.
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反相高效液相色谱法拆分谷氨酸和天门冬氨酸对映体
目的:建立HPLC法拆分了谷氨酸(Glu)和天门冬氨酸(Asp)对映体的方法.方法:本文利用邻苯二甲醛(OPA)柱前衍生,以β-环糊精(β-CD)为手性添加剂,乙腈-缓冲溶液(0.02 mol·L-1醋酸钠:三乙胺=100:0.018,)为流动相,检测波长为330 nm.考察了不同色谱柱、缓冲溶液pH、β-环糊精浓度、流动相比例和柱温对分离的影响.优化的色谱条件为:色谱柱为Hypersil AA-ODS,分离温度40℃,流动相为乙腈-缓冲溶液(0.02 mol·L-1醋酸钠:三乙胺=100:0.018,用2%醋酸调pH 7.2,其中含6 mmol·L-1β-CD)=1:99.结果:在优化的色谱条件下,上述两种氨基酸对映体均得到基线分离.结论:所建立的方法简便、快速、分离度高.
