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免疫磁珠捕获联合PCR-ELISA定量检测结核分枝杆菌的方法学研究
目的：采用免疫磁珠捕获（IMC）联合双内标PCR-ELISA（IMC-PCR-ELISA）技术，建立定量检测结核分枝杆菌的方法。方法制备能够特异性捕获结核分枝杆菌的免疫磁珠（Dynabeads?）。并根据结核分枝杆菌M tp40基因序列以及结核分枝杆菌复合体群IS6110序列，设计2对特异性引物（上游引物的5′端用生物素修饰），以及2条与PCR扩增片段等长的内参照片段（其与扩增模板在引物区的序列相同）和3套捕获探针（3′端用地高辛标记）。先通过免疫磁珠特异性捕获结核分枝杆菌，再联合双内标PCR-ELISA技术检测结核杆菌。结果采用IMC-PCR-ELISA技术定量检测结核分枝杆菌，全过程约4 h ，检测限为5×103 copies/mL ，当低内标模板浓度在30～70 copies/mL ，高内标模板浓度在8000～12000 copies/mL时，计算出的浓度与实际加入的目的模板浓度之间有良好的线性关系（r2＝0．998），未发现非特异性反应。结论成功建立了IMC-PCR-ELISA定量检测结核分枝杆菌的方法，此方法具有快速、灵敏、特异、可定量的特点。
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GC法同时测定肤舒止痒膏中5个有效成分的含量
目的:利用气相色谱-质谱联用仪鉴定出肤舒止痒膏中5个有效成分(异龙脑、龙脑、苦参碱、槐定碱、槐果碱),并建立气相色谱-氢火焰离子法同时测定肤舒止痒膏中这5个有效成分的分析方法.方法:样品经氨水碱化后,用乙酸乙酯萃取,以水杨酸甲酯和邻苯二甲酸二辛酯作为双内标,采用HP-INNOWAX毛细管色谱柱(30 m×0.25 mm×0.25 μm),检测器为FID检测器,进样口温度为260 ℃,检测器温度为260℃.分流进样,分流比为10∶1.升温程序为初始温度100℃,保持2 min;以5℃·min-1升至250℃,保持20 min.结果:异龙脑、龙脑、苦参碱、槐定碱、槐果碱浓度分别在0.0373 ～0.0869 mg· mL-1(r =0.9997)、0.0547 ～0.128 mg· mL-1(r =0.9999)、0.0444 ～0.133 mg· mL-1(r =0.9999)、0.00224～0.0448 mg· mL-1(r=0.9998)、0.0335 ～0.100 mg·mL-1(r=0.9998)质量浓度范围内线性关系良好,平均回收率(n=9)分别为97.8％、98.0％ 、98.4％、97.8％、98.1％.结论:该方法简单、灵敏,准确度高,可用于同时测定肤舒止痒膏中的异龙脑、龙脑、苦参碱、槐定碱、槐果碱的含量.
