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cDNA末端快速扩增聚合酶链反应文献资料
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扇贝防御素基因改良5′cDNA末端快速扩增聚合酶链反应筛选方法的研究
目的 应用改良5′cDNA末端快速扩增聚合酶链反应(RACE)筛选扇贝抗菌肽基因,寻找基于基因序列同源性的双壳类抗菌肽(AMP)的筛选方法.方法 TRIzol法提取扇贝血淋巴中总RNA.根据贻贝抗菌肽的保守序列设计基因特异性简并引物,进行改良5′ RACE钓取可能防御素基因cDNA的5′端序列、AT克隆、DNA测序和同源性分析.结果采用改良5′ RACE从扇贝血淋巴RNA中得到多个未知基因的cDNA 5′端序列,挑选600 bp以下的基因片段进行AT克隆和DNA测序后得到3个插入片段序列,其长度分别为257、275和511 bp.通过BLAST程序搜索GenBank核酸数据库,未发现与之高度同源的基因.结论从扇贝血淋巴中获得的3个5′端cDNA序列可能属于新的基因.应用改良5′ RACE能钓取含防御素保守序列的新基因片段,由此表明此方案具有可行性.
关键词： 防御素 抗菌肽 扇贝 cDNA末端快速扩增聚合酶链反应 基因
