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pCI-neo文献资料
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小鼠肥大细胞瘤P815特异抗原P1A的克隆与表达
目的克隆小鼠肥大细胞瘤P815细胞株的P1A基因以制备肿瘤DNA疫苗.方法用RT-PCR方法制备P1A基因,以哺乳细胞高效表达质粒pCI-neo为载体,构建重组DNA疫苗.重组体用克隆位点上游和下游的T7和T3启动子序列为测序引物,用自动测序仪测序鉴定克隆的正确性.再将鉴定过的重组质粒用磷酸钙法转化293细胞,用RT-PCR法鉴定转化细胞中P1A基因的表达.结果正确构建了P1A/pCI-neo重组质粒,并且在转化此质粒的293细胞中检测出了P1A的表达.结论成功地构建了重组P1A/pCI-neo肿瘤疫苗,可以进行下一步的肿瘤动物模型的疫苗接种及疗效观察.
