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P1A文献资料
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小鼠肥大细胞瘤P815特异抗原P1A的克隆与表达
目的克隆小鼠肥大细胞瘤P815细胞株的P1A基因以制备肿瘤DNA疫苗.方法用RT-PCR方法制备P1A基因,以哺乳细胞高效表达质粒pCI-neo为载体,构建重组DNA疫苗.重组体用克隆位点上游和下游的T7和T3启动子序列为测序引物,用自动测序仪测序鉴定克隆的正确性.再将鉴定过的重组质粒用磷酸钙法转化293细胞,用RT-PCR法鉴定转化细胞中P1A基因的表达.结果正确构建了P1A/pCI-neo重组质粒,并且在转化此质粒的293细胞中检测出了P1A的表达.结论成功地构建了重组P1A/pCI-neo肿瘤疫苗,可以进行下一步的肿瘤动物模型的疫苗接种及疗效观察.
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IL-12对小鼠肥大细胞瘤基因疫苗的免疫学作用
目的研究小鼠肥大细胞瘤P815基因疫苗和鼠IL-12对该疫苗的免疫学作用.方法将小鼠肥大细胞瘤P815特异抗原基因P1A克隆到真核表达质粒pCI-neo中;用P815细胞对DBA/2小鼠右腹侧皮下注射,构建P815小鼠肿瘤模型;以重组基因疫苗单独或与鼠IL-12真核表达质粒一起肌肉注射,观察肿瘤的消长、特异细胞毒T淋巴细胞激活和抗体的生成情况.结果重组基因疫苗在体外有很好的表达,注射后CTL的杀伤效率为40%,IL-12共注射的CTL杀伤效率达到60%.免疫后,30%小鼠的肿瘤出现消退;同IL-12共注射则有50%的小鼠的肿瘤出现消退.2种情况下都不能检测到任何特异抗体的产生.结论重组P1A肿瘤疫苗能有效激活机体的肿瘤特异免疫应答;基因疫苗对小鼠P815肿瘤的治疗作用主要归因于细胞免疫;IL-12有增强这种免疫应答的作用.
