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SARS-CoV S2蛋白基因的克隆及其在Vero E6细胞中的表达
目的克隆人SARS病毒S2蛋白分子的编码序列,并在VeroE6细胞上获得表达.方法从人SARS病毒cDNA文库中用PCR技术克隆编码SARS病毒S2蛋白的片段.将它插入质粒载体PVAXl中构建重组S2-pVAXl真核表达载体,并对插入片段序列进行测序.采用脂质体法转染VeroE6细胞,用Western blotting检测SARS-CoV S2蛋白的表达情况.结果用PCR方法扩增出一个1 845bp的基因片段,并插入pVAXl载体中,成功构建出重组S2表达载体,经测序证实克隆的S2片段阅读框正确完整.将其转染的Vero E6细胞经Western Blotting检测获得一条特异性目的蛋白条带.结论成功克隆基因并获得表达S2分子的Vero E6细胞系.
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汉坦病毒感染体外诱导VeroE6细胞热休克蛋白的表达
目的研究汉坦病毒(HTV)感染后对细胞应激基因表达的影响. 方法用HTV感染其敏感细胞株VeroE6细胞,用Western印迹杂交、RNA斑点杂交及原位杂交分别分析热休克蛋白(HSP)的表达及编码HSP的mRNA水平的变化. 结果病毒感染后细胞内HSP70及热休克蛋白mRNA 水平均有增高 ,而HSP65及HSP27的表达则无明显改变. 结论 HTV感染可以直接诱导HSP7 0的高表达,可能在保护细胞免受病毒感染损伤方面具有一定意义.