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Sry监测体外扩增造血细胞植入效果的实验研究
目的探讨Y染色体性别决定基因(Sry)作为评价和追踪造血细胞移植后植入状态检测指标的可行性.方法根据Sry DNA序列设计引物及制备探针,然后进行PCR检测、斑点杂交和原位杂交,动态追踪经不同条件下体外扩增的纯系雄性小鼠BMMNC回输至雌性小鼠后的植入状态.结果 PCR结果显示在各移植组小鼠的骨髓有核细胞、脾细胞及外周血白细胞中均有Y染色体特异性序列的存在;斑点杂交结果显示在各回输组间并无明显差别,但用脾脏组织作原位杂交的结果则发现基质细胞支持扩增回输组的阳性颗粒数目与输注新鲜细胞组相似,但略少于雄性小鼠;而输注细胞因子扩增细胞实验组小鼠则明显少于雄性动物的阳性对照标本和基质细胞支持扩增回输组.结论 (1)经重复检测表明上述方法的重复性好,结果可信,可作为检测性别不同时造血干细胞移植效果的一种检测手段;(2)证实基质细胞支持下的体外扩增的造血细胞具有较好的植入能力.
关键词： Y染色体性别决定基因 造血干细胞移植 植入状态 体外扩增 基质细胞 -
Y染色体性别决定基因监测BMSCs治疗兔股骨头坏死的实验研究
目的 探讨BMSCs移植治疗兔股骨头坏死(osteonecrosis of the femoral head,ONFH)后细胞在体内的存活情况及坏死股骨头内新骨形成情况.方法 4～5月龄新西兰大白兔49只,雌性48只,雄性1只,体重2.0～2.5 kg.取兔股骨及胫骨内骨髓,采用密度梯度离心法行BMSCs分离培养并传代.取第3代细胞行1,1'-双十八烷.3,3,3',3'-四甲基吲哚羰花青-高氯酸盐(1,1'-dioctadecyl-3,3,3',3'-tetramethylindocarbocyanine perehlorate,Dil)荧光标记,制备浓度为2.5×108个/mL细胞悬液.采用局部液氮注射冷冻法制备兔右侧ONFH模型.将雌兔随机分为3组,每组16只,A组单纯造模为对照,B组造模后注射自体Dil荧光标记BMSCs悬液4μL,C组造模后注射雄兔异体DiI荧光标记BMSCs悬液4μL.术后2、4、6、8周各组分别处死4只动物,行双侧股骨头X线观察,取股骨头标本行HE染色及Masson染色,测定新生骨小梁在股骨头所占的体积百分比.取心脏、肺、肝、脾、肾组织及股骨头标本组织,荧光显微镜下观察各组织中Dil荧光标记细胞的表达,PCR检测各组织中Y染色性别决定基因(sex determining region of the Y,Sry)的表达.结果 术后动物均存活至实验完成.X线片示A组股骨头随时间延长逐渐出现骨坏死:B、C组股骨头骨密度逐渐增加,未出现骨坏死.组织学观察示B、C组随时间延长骨组织修复明显,A组无明显变化.各时间点B、C组新生骨小粱占股骨头体积百分比均高于A组,比较差异均有统计学意义(P＜0.01),B、C组间比较差异无统计学意义(P＞0.05).术后各时间点B、C组心脏、肺、肝、脾、.肾组织均未见DiI荧光标记细胞.PCR结果显示,3组各时间点心脏、肺、肝、脾、肾组织中均未见Sry基因表达;C组各时间点股骨头标本可见Sry基因的表达,A、B组未见.结论 异体BMSCs移植后细胞可在股骨头局部存活并诱导新骨形成,并未见体内其他组织中再分布.
关键词： BMSCs 股骨头坏死 Y染色体性别决定基因 兔
