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EV71亚单位VP1的原核表达、纯化及免疫原性分析
目的 原核表达并纯化人肠道病毒71型(EV71)亚单位VP1蛋白,分析其免疫原性.方法 采用PCR技术扩增EV71 VP1 (AB204852.1)基因序列,构建重组质粒pET32a(+)-VP1并转化E.coli BL21 (DE3),IPTG诱导表达6×His-VP1融合蛋白,将表达的蛋白用Ni2+-NTA树脂纯化、TGE液复性后免疫新西兰大白兔,制备抗VP1的抗血清,用间接ELISA法检测抗血清效价.结果 重组工程菌pET32a(+)-VP1/BL21 (DE3)高效表达了相对分子质量约为42 kD的VP1融合蛋白,蛋白经纯化复性后免疫新西兰大白兔所得抗血清效价大于1∶625 000.结论 原核表达系统pET32a(+)/NL21 (DE3)能高效表达EV71亚单位VP1融合蛋白,蛋白经纯化复性后具有良好的免疫原性,为进一步研制以双歧杆菌为抗原载体的新型疫苗奠定了基础.
关键词： 人肠道病毒71型(EV71) VP1融合蛋白 原核表达 免疫原性 -
人免疫球蛋白中肠道病毒71型中和抗体效价的测定
采用经典微量细胞病变法,应用近两年分离自中国手足口病(HFMD)高发区的3株肠道病毒71型(EV71)病毒株,对中国不同血液制品厂家生产的35批人免疫球蛋白制品进行抗-EV71中和效价检测.结果显示,3株不同EV71病毒株间的抗-EV71中和效价差异均在4倍以内,差异无显著的统计学意义(F=2.323,P>0.05).根据这3株毒株检测结果判定,35批人免疫球蛋白的抗-EV71均为阳性,肌肉注射用免疫球蛋白(简称肌丙)的抗-EV71-GMTs(525.9)显著高于静脉注射用免疫球蛋白(简称静丙)的GMTs(252.3,F=66.518,P<0.01).30批静丙的抗-EV71-GMTs中和效价分布在128.0～384.0之间.应开展原料血浆中抗-EV71中和效价的筛选,研制高效价的EV71特异性免疫球蛋白制品,用于HFMD的治疗和预防.
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2010年中国人免疫球蛋白中EV71中和抗体效价的比较研究
目的:了解2010年我国生产的静注人免疫球蛋白(IVIG)中抗- EV71中和抗体效价的情况,为治疗EV71引起的手足口病( HFMD)提供特异性治疗药物.方法:采用经典微量细胞病变法,应用近2年分离自中国大陆的2株肠道病毒71型(EV71)病毒株,对我国不同血液制品厂家生产的97批IVIG进行抗- EV71中和效价检测,比较不同批次IVIG的EV71中和效价.结果:19家生产企业生产的97批IVIG的EV71中和效价几何平均滴度(GMTs)为1∶180(1∶170～1∶191).其中有7家生产企业生产的12批制品的中和效价大于1∶256,以S公司生产的20100406批制品效价高为1∶543,以A公司生产的含有1∶256以上效价的IVIG批数多(5批),使该公司生产的IVIG的平均EV71中和抗体效价显著高于其他10家企业(P＜0.05).进一步分析显示,该2个公司分别是通过对献血员的EV71中和效价进行筛选,挑选出高效价血浆和选择人群抗体水平较高地区作为血浆来源地进行投料,而制备出了含有高效价EV71中和抗体的IVIG.结论:本研究显示,生产企业只要对原料血浆进行合理控制,制备出含有高效价EV71中和抗体的IVIG是可行的.
