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重组质粒标准品文献资料
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肠道常见菌群荧光定量PCR检测方法的建立
目的 分别建立检测部分肠道常见菌群的荧光定量PCR方法,为肠道菌群及其相关疾病的研究提供快速、敏感、准确的检测手段.方法 根据肠道细菌16S rRNA基因序列,选择针对不同肠道细菌的特异性引物,建立并优化荧光定量PCR检测方法,并对建立的方法进行特异性及重复性实验.采用基因重组技术,构建肠道常见菌群目的基因的重组质粒,作为PCR检测定量参考.结果 成功建立了检测大肠埃希菌、肠球菌、乳杆菌、双歧杆菌、产气荚膜梭菌、拟杆菌、拟杆菌门菌、硬壁菌门菌以及肠道菌群总量的荧光定量PCR方法.方法特异性试验结果表明,反应体系与待测菌以外的其他细菌无交叉反应.重复试验结果显示,各待测菌8次重复试验的变异系数均小于2％.各待测菌标准曲线的相关系数r≥ 0.994,线性关系良好.结论 本研究建立的Eva Green荧光定量PCR检测方法可以特异的从粪便中检出部分肠道常见菌群,且方法重复性好,是快速、敏感、准确地检测肠道菌群的有利手段.
