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杜氏利什曼原虫无鞭毛体蛋白N端胞外区基因(ast1)的克隆及表达
构建杜氏利什曼原虫无鞭毛体蛋白N端胞外区基因(ast1)的原核表达重组质粒pET32a(+)-ast1,并在大肠杆菌BL21中进行表达.从杜氏利什曼原虫基因组DNA中扩增无鞭毛体蛋白基因并用SOSUI 和Tmpred方法预测其跨膜区结构;根据跨膜区预测的结果,扩增基因ast1并将其连接到原核表达载体pET32a(+)中,重组质粒命名为pET32a(+)-ast1,并在大肠杆菌 BL21(DE3)中进行表达.SDS-PAGE 和免疫印迹分析表明,在约27 kDa处获得重组目的蛋白rAST1的表达,显示成功构建杜氏利什曼原虫原核表达重组质粒pET32a(+)-ast1,并在大肠杆菌BL21中获得有效表达.
