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NO对不同天龄红细胞保存质量影响的初步研究
目的 探讨一氧化氮(NO)对采用percoll密度梯度离心法分离的不同天龄红细胞(RBC)功能状态的影响作用.方法 1)将Percoll细胞分离液配制成5个不连续密度梯度(1.091,1.098 5,1.106,1.1135,1.121 g/ml),将RBC按平均密度大小分层,依次吸取每层RBC分别做RBC内丙酮酸激酶(PK)含量测定并计算天龄、RBC内ATP含量检测、RBC变形性评价,以及RBC膜蛋白Western Blot.2)从同1份滤白全血中取出2等份,1份为实验组:加适宜浓度的NO溶液,另1份为对照组:加等体积红细胞保存液Ⅲ,分别于保存初期、中期、末期检测2组血液及不同天龄RBC的功能.结果 1)同1份样品经密度梯度离心分离后,RBC随着密度的增大,PK活性逐渐减小(6.192±1.25、5.165±0.84、4.538 ±0.76,P＜0.05)、天龄逐渐增加(10.409、34.957、49.945)、ATP含量逐渐减少(4.755±0.037、3.242±0.445、2.929±0.153,P＜0.01)、RBC变形性逐渐降低(200-1切变率下,0.381±0.005、0.340±0.033、0.281±0.028、P＜0.05)、RBC膜带3蛋白量减小、聚簇化的带3蛋白量增多、膜上结合的IgG含量增多.2)NO组与对照组相比,全血各指标无明显差异,但NO组保存中、末期老年RBC变形性明显高于对照组(200 -1切变率下,中期:0.290±0.021vs0.276±0.021、0.229±0.024 vs 0.211±0.027；末期:0.277±0.017 vs O.263±0.019、0.213±0.038vs0.193 +0.039,P＜0.01).结论 RBC功能随密度的增大逐渐降低；NO可明显改善老年RBC的变形性,但对全血无明显影响.
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红细胞密度与天龄相关性研究
目的 研究红细胞密度与天龄的相关性,不同密度红细胞所对应的平均天龄.方法 采用非连续密度梯度分离方法,将全血红细胞分为6个不同密度的红细胞部分.测定不同部分红细胞丙酮酸激酶活性,通过各部分丙酮酸激酶活性与全血红细胞丙酮酸激酶活性的比值(Ratio)推测各部分红细胞平均天龄;测定各部分红细胞膜表面磷脂酰丝氨酸(PS)表达阳性率,来反映红细胞密度与衰老(天龄)的相关性.结果 根据红细胞比值,各部分红细胞平均天龄由低密度至高密度依次为11.5、46、63.8、74.6、80.5、102.2 d.随着红细胞密度的增加,PS表达阳性率也逐渐增高.结论 不同密度的红细胞代表不同的细胞天龄,采用密度梯度分离方法可以分离出不同天龄段的红细胞,为进一步研究红细胞天龄与功能的相关性提供了方法学基础.
