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蛋白C特异性激活剂文献资料
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蝮蛇毒蛋白C激活物的纯化与活性分析
目的 探索从国产蝮蛇毒中分离纯化人血浆蛋白C激活物(PCA)的方法 及其用于蛋白C的鉴定.方法 以国产蝮蛇毒为原料,通过溶解、离心、透析,利用Q Sepharose Fast Flow离子交换层析和Superdex G75凝胶过滤法分离纯化PCA组份.通过SDS-PAGE观察PCA组份的分子量,用发色底物法和凝固法分别测定活化PC(APC)的酰胺酶活性和抗凝活性.结果 经两步层析,从蝮蛇粗蛇毒中纯化出PCA组份,SDS-PAGE图谱显示在分子量51 kD左右呈现1条蛋白带;经生物学活性鉴定:该组份在体外能迅速将PC激活为APC,APC的酰胺酶活性(A405)高约为Protac(R)(唯一商品化的PC激活剂产品)作用的2.8倍,抗凝活性(秒值)高约为Protac(R)作用的I.4倍,比活性2.20 IU/mg;不同浓度组份激活PC的酰胺酶活性和抗凝活性均随组份浓度的增大而升高,有明显的量效关系.结论 采用离子交换层析和凝胶过滤法,可以从国产蝮蛇粗蛇毒中分离纯化出PCA组份,该组份具有较强的激活PC的能力,其生物活性与浓度呈正相关.
