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测序"大引物"法文献资料
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丙型肝炎病毒E1基因的克隆、表达、序列分析及定点突变
目的:为了获得具有完整框架的HCV E1基因.方法:用RT-PCR从HCV(+)血清中扩增出E1基因,在原核系统中进行表达、测序及定点突变,并对表达的E1蛋白进行纯化及初步的活性鉴定.结果:在86株阳性克隆中,11株表达了不完整的HCV E1蛋白;使用表达出来分子量大的蛋白作为抗原,在HCV(+)血清中抗-E1的检出率为16.7%(2/12),对其插入的E1基因(HCVe118)测序,表明1347位的C→T而形成终止密码,用"大引物"法对HCVe118作定点突变,使T→C,从而获得具正确框架的HCV E1基因.结论:在原核表达系统中,去除C末端的HCV E1基因可获得高效表达;表达的HCV E1蛋白抗原性很弱."大引物"法用于基因改构工作简便而又快速.
