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  • PEP-1-VP3融合蛋白的分离纯化与初步鉴定

    作者:蔡召忠;陈萍;邓守恒

    目的 构建融合蛋白PEP-1-VP3的原核表达质粒,并进行诱导表达和蛋白纯化.方法 通过PCR方法自PGEX-6P-1/TAT-VP3质粒中扩增VP3基因,运用靶向克隆酶,将VP3基因插入到线性载体pET15b-PEP-1中,构建重组表达质粒pET15b-PEP-1-VP3,经测序证实构建成功后转化E.coli Rosetta,表达PEP-1-VP3融合蛋白,经Ni-NTA树脂亲和层析,进行SDS-PAGE及Western Blot分析鉴定.结果 成功构建PEP-1-VP3融合蛋白原核表达载体,表达并纯化了17.6kD的PEP-1-VP3融合蛋白.结论 所构建的PEP-1-VP3融合蛋白为体内抗肿瘤研究提供了理论基础.

  • PEP-1-VP3融合蛋白的原核表达及纯化

    作者:邓守恒;陈萍

    目的:构建融合蛋白PEP-1-VP3的原核表达质粒,并进行诱导表达和蛋白纯化。方法:通过PCR方法自 PGEX -6P -1/TAT -VP3质粒中扩增 VP3基因,运用靶向克隆酶,将 VP3基因插入到线性载体pET15b-PEP-1,构建重组表达质粒pET15b-PEP-1-VP3,经测序证实构建成功后转化E. coli Rosetta,表达PEP-1-VP3融合蛋白,经Ni-NTA树脂亲和层析,纯化产物进行SDS-PAGE及Western blot分析鉴定。结果:成功构建PEP-1-VP3融合蛋白原核表达载体,表达并纯化了分子量为17.6kD的PEP-1-VP3融合蛋白。结论:PEP-1-VP3融合蛋白原核表达质粒的构建及目的蛋白的表达、纯化,为体内应用PEP-1-VP3融合蛋白进行抗肿瘤研究提供了理论基础。

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