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线粒体转录B2文献资料
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线粒体转录复合物各因子质粒标准品的构建
目的:构建大鼠线粒体转录因子 TFAM(A)、线粒体转录因子 TFB1M (B1)、线粒体转录 TFB2M (B2)及线粒体RNA 聚合酶(POLRMT)的质粒标准品,为检测内耳细胞线粒体 TFAM、TFB1 M、TFB2M、POLRMT 的 mRNA 表达水平做基础。方法:设计特异性引物和探针,提取大鼠内耳组织总 mRNA 逆转录成 cDNA,PCR 扩增、纯化目的片段,将纯化产物与 pZer-oBack /blunt 载体重组,提取重组质粒,经测序鉴定后,用实时荧光绝对定量 PCR 建立标准曲线。结果:测序结果与各目的序列一致,获得良好的标准曲线(R2>0.99)。结论:成功构建了各目的基因的质粒标准品。