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"自杀性"DNA文献资料
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HPV16 E7"自杀性"DNA 疫苗的构建及其体外表达特性研究
目的 构建人乳头瘤病毒 16 型(HPV16)E7基因的"自杀性"DNA 疫苗,并研究其体外表达能力及诱导细胞凋亡作用.方法 以 pET32/E7 质粒为模板.用PCR方法扩增 HPV16 E7 基因,构建真核表达重组质粒pSCA/E7,经 PCR、酶切和测序鉴定正确后,将重组质粒转染 BHK-21 细胞,然后用免疫荧光技术检测 HPV16 E7在细胞中的表达,用dUTP缺口末端标记技术(TUNEL)进行染色检测其诱导细胞凋亡作用.结果 PCR 扩增得到约 400 bp 的目的 基因片段,测序结果与 GenBank 中的东亚型 HPV16 E7 基因序列 100%同源.免疫荧光技术检测证实,pSCA/E7 重组质粒能在 BHK-21 细胞中表达目的 基因.TUNEL 检测证实,pSCA/E7 重组质粒能诱导被转染的 BHK-21 细胞发生凋亡.结论 成功构建 HPV16 E7 基因的重组质粒 pSCA/E7,该重组质粒可在 BHK-21细胞中表达,并能诱导被转染的细胞发生凋亡.
