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SEREX方法筛选人胎盘抗原
目的 筛选并获得来自人胎盘有潜在应用价值的抗原.方法 基于血清学筛选重组cDNA表达文库(serological analysis of recombinant cDNA expression library,SEREX)技术,制备人绒毛组织免疫的兔血清,利用该免疫血清筛选人胎盘组织cDNA表达文库,通过两轮筛选得到免疫反应阳性的单克隆重组噬菌体并测序,并对所得到的序列进行生物信息学分析.结果 经过两轮筛选共得到69个阳性反应克隆,序列分析发现它们代表12种不同的基因序列,其中功能已知基因9个,功能未知基因3个,进一步分析发现绒毛膜生长催乳激素基因(CSH1和CSH2)有57个阳性反应克隆.占总数的82.6%,可能是一个具有重要功能的抗原基因.所筛选到的其他基因与胚胎生长发育相关.结论 SEREX技术筛选胎盘抗原是行之有效的,本实验筛选出的抗原基因对研究胚胎生长发育具有一定的意义.
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HLA-E在RSA人绒毛组织中的表达与临床意义
目的 研究人类白细胞抗原E(HLA-E)在反复自然流产(RSA)和正常流产人绒毛组织中的蛋白和mRNA表达,探讨HLA-E与不明原因RSA的相关性及其临床意义.方法 采用免疫组织化学技术和逆转录-聚合酶链反应技术检测35例RSA人绒毛组织和35例正常流产人绒毛组织中细胞学定位以及HLA-E在mRNA水平的表达.结果 免疫组织化学检测结果显示两组中均有HLA-E阳性表达,RSA组的HLA-E在人绒毛组织中阳性表达率低于正常流产组(χ2=131.125,P<0.05).逆转录-聚合酶链反应结果显示RSA组和正常流产组均有HLA-E表达,对比显示RSA组的HLA-E表达低于正常流产组(t=1.937,P<0.05).结论 RSA妊娠妇女早孕绒毛组织中HLA-E在组织细胞学蛋白和mRNA水平均较正常人工流产妊娠妇女早孕绒毛组织中降低,提示自然流产妊娠妇女存在HLA-E表达异常,HLA-E可能与RSA的发生关系密切.
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IL-10在反复自然流产人绒毛组织的表达及意义
目的:通过研究白细胞介素-10 (IL-10)在反复自然流产和正常流产人绒毛组织和血清中的表达比较来探讨IL-10与不明原因反复自然流产的相关性及其临床意义.方法:采用免疫组织化学技术和逆转录-聚合酶链反应技术检测35例反复自然流产者(实验组)和35例正常流产者(对照组)人绒毛组织中IL-10的细胞学定位以及在mRNA水平的表达；ELISA法定量分析IL-10在两组血清中的表达.结果:免疫组织化学检测结果显示两组组织中均有IL-10阳性表达,实验组IL-10在人绒毛组织中的阳性表达率低于对照组(P＜0.05).RT-PCR结果显示实验组和对照组均有IL-10表达,对比显示实验组IL-10表达低于对照组.ELISA测定结果显示IL-10在实验组的表达低于对照组.结论:IL-10的表达在实验组早孕绒毛组织细胞学定位及mRNA水平检测均较对照组降低,在血清中的表达量也是实验组低于对照组,提示自然流产妊娠妇女存在IL-10细胞因子表达异常,IL-10可能在维持正常妊娠过程中起到重要作用.
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RT-PCR检测超声辐照后人早孕绒毛组织中 Caspase-3 mRNA的表达
目的:探讨诊断性超声对早孕胚胎组织安全性问题.方法:选取健康早孕而自愿要求终止妊娠的妇女66例,随机分组,不同的超声辐照方式和不同辐照时间后12-24 h行人工流产取绒毛组织,用半定量RT-PCR方法分析绒毛组织中Caspase-3 mRNA的表达.结果:绒毛组织Caspase-3 mRNA表达,腹部超声5 min组与对照组(未行超声辐射组)相比无统计学差异(P＞0.05),而10 min组、15 min组与对照组比较有统计学意义(P＜0.05),但此两组间无统计学差异(P＞0.05);阴道超声5 min、10 min、15 min组与对照组比较均有显著的统计学意义(P＜0.01),且各组间比较也有差异(P＜0.01);同一时间组内阴道超声与腹部超声比较均有统计学差异(P＜0.05).结论:诊断性超声经腹部5 min以内可以认为是安全的,从近期的生物学效应角度看,经阴道超声在5 min时就可能存在损伤效应.
关键词： RT-PCR 诊断性超声 人绒毛组织 Caspase-3 mRNA
