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miRNA-221-3p文献资料
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血清miRNA-221-3p标准品的制备及其绝对含量测定
目的:构建miRNA-221-3p的标准品,并检测其血清绝对含量,为今后进一步明确检测血清miRNA-221-3p在辅助判断疾病中的潜在价值和意义.方法:设计miRNA-221-3p特异性引物,提取样品血清总RNA,反转录获得含miRNA-221-3p特异性引物cDNA.通过PCR获得含有miRNA-221-3p的DNA片段,然后置入到pcDNA3.1质粒中.经测序确定重组质粒pcDNA3.1(pcDNA3.1-miRNA-221-3p)构建正确.通过PCR从pcDNA3.1-miRNA-221-3p中获得含有T7启动子和miRNA-221-3p的基因片段,然后用体外转录得到miRNA-221-3p的标准品,后计算出标准品的浓度(copies/μg RNA).取miRNA-221-3p标准品反转录进行梯度稀释实时荧光定量PCR,根据标准品的浓度和CT值绘制标准曲线.结果:miRNA-221-3p重组质粒构建成功,体外转录得到纯化的miRNA-221-3p标准品.标准曲线公式为:Y=-0.255X+12.543,相关系数R2=0.9999,X代表Ct值,Y代表样品的含量(copies)的lg值.结论:成功获得血清miRNA-221-3p标准品,miRNA-221-3p标准品绝对含量(copies/μg RNA)等于3.49214E+12e-0.5871CT值.
关键词： 血清 miRNA-221-3p 标准品 绝对含量
