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抗人SOCS1单克隆抗体的制备及其生物学特性的鉴定
目的 制备高效价的抗人SOCS1单克隆抗体并对其生物学特性进行鉴定.方法 以重组GST-SOCS1融合蛋白免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与Sp2/0细胞融合,经多次筛选及克隆化,建立可稳定分泌抗SOCS1单克隆抗体的杂交瘤细胞株.用ELISA及Western blot鉴定单克隆抗体的特性,并测定其效价、Ig亚类及相对亲和力.结果 筛选到一株可稳定分泌抗人SOCS1单克隆抗体的杂交瘤细胞株.Western blot显示在相对分子量为6.0×104处出现特异性反应带.杂交瘤细胞培养上清效价为1∶1280,腹水效价为1∶102400,Ig亚类为IgG1,相对亲和力达1.17×107L/mol.结论 成功制备出能特异性识别人SOCS1的单克隆抗体,为进一步研究人体细胞因子信号传导的负反馈调节及SOCS1在微生物感染中的免疫调节作用奠定了基础.
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肠道病毒EV71新型VLPs疫苗的制备及鉴定
目的 制备肠道病毒71型(EV71)的新型病毒样颗粒(VLPs)疫苗,为手足口病防治奠定基础.方法 应用分子克隆技术构建外壳蛋白VP1融合基因cVP1,免疫细胞化学及Western Blot测定该融合基因在HeLa细胞表达情况;将cVP1克隆于杆状病毒表达载体pFastbac1,应用昆虫细胞TN5制备重组杆状病毒cVP1 rBV,再将此重组病毒与本室保存的gag rBV以不同MOI比例共感染昆虫细胞TN5,得到含有VP1的重组嵌合病毒样颗粒cVP1 VLPs,后以Western Blot及电镜进行鉴定.结果 免疫细胞化学及Western Blot结果显示构建的融合基因cVP1可在真核细胞内表达,并成功制备成cVP1 rBV,该重组杆状病毒和gag rBV共感染昆虫细胞制备的VLPs结构完整.结论 成功制备了EV71的新型VLPs疫苗,为后续研究打下了基础.
