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RNA干扰过表达文献资料
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干扰和过表达热休克转录因子2对肠上皮细胞炎症的影响
目的 通过脂质体法干扰和过表达肠上皮细胞的热休克转录因子2 (heat shock factor 2,HSF2),探讨其对肠上皮细胞炎症反应的影响和涉及的信号通路,为溃疡性结肠炎发病机制及诊治靶点提供线索.方法 选取结肠肿瘤上皮细胞Caco-2作为研究材料,采用脂质体法分别转染HSF2 siRNA和pCMV-HSF2-FLAG重组质粒,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测转染前后细胞生理特性的变化;并用脂多糖(LPS)刺激转染组及对照组细胞,Griess Reagent System测定各组细胞的NO浓度;RT-PCR检测细胞炎性酶iNOS、COX-2,炎症因子TNF-α、IL-8mRNA转录水平;ELISA检测细胞培养基中TNF-α、IL-8含量;Western Blot检测COX-2、IκB、NF-κB p65蛋白水平,以及ERK1/2、JNK和p38磷酸化水平.结果 MTT法检测结果显示,脂质体法转染入siRNA或重组质粒对细胞活性无显著影响;干扰HSF2后,LPS刺激Caco-2产生iNOS、COX-2、TNF-α及IL-8,在mRNA和蛋白水平均较对照组表达上调(P＜0.05),这一过程中信号通路IκB表达降低,而NF-κB p65表达升高,MAPK中ERK1/2磷酸化水平降低,而JNK和p38则呈增强趋势.转染入重组质粒过表达HSF2后,结果则相反.结论 HSF2通过增强ERK1/2蛋白磷酸化水平,抑制JNK、P38及NF-κB表达,能有效抑制LPS引起Caco-2细胞的炎性酶及炎性因子的表达,在炎症反应中起保护性作用,对研究溃疡性结肠炎的发病机制提供线索,可能成为其治疗新的靶点.
