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TE-1细胞系文献资料
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稳定过表达幼虫巨大致死基因2(LLGL2)的食管鳞癌细胞系的建立
目的 构建人幼虫巨大致死基因2(LLGL2)慢病毒表达载体,并建立稳定表达的人食管鳞癌KYSE450细胞系和TE-1细胞系.方法 PCR扩增人LLGL2全长基因序列,连接插入至pCDH-CMV-IRES-GFP-EF1-Puro慢病毒载体中,并对重组质粒进行双酶切及测序验证.将重组质粒pCDH-CMV-LLGL2-IRES-GFP-EF1-Puro和PHR、水疱性口炎病毒G蛋白(VSVG)共转染HEK293T细胞进行病毒包装,利用该病毒液感染KYSE450细胞和TE-1细胞.经嘌呤霉素筛选建立LLGL2稳定过表达的KYSE450细胞系和TE-1细胞系,用Western blot法检测LLGL2的表达情况.结果 双酶切和测序分析,成功构建pCDH-CMV-LLGL2-IRES-GFP-EF1-Puro慢病毒表达载体质粒.Western blot法检测结果显示,与对照组相比,感染病毒液的细胞LLGL2蛋白水平明显增高.结论 成功建立了稳定过表达LLGL2基因的KYSE450细胞系和TE-1细胞系.
关键词： LLGL2 慢病毒载体 KYSE450细胞系 TE-1细胞系
