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重组HBcAg激活p38MAPK信号通路增加髓源性树突状细胞IL-15的分泌
目的 探讨重组人乙型肝炎病毒核心抗原(rhHBcAg)诱导髓源性树突状细胞(mDC)分泌白细胞介素15(IL-15)的机制.方法 采用人单核细胞磁珠负分选试剂盒分选外周血单核细胞,采用粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、IL-4和肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导分化为mDC,10 μg/mL rhHBcAg刺激mDC 1～6 d;分别用25 μmol/L磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3 K/Akt)信号通路抑制剂LY294002、1.μmol/L p38丝裂原激活蛋白激酶(p38MAPK)信号通路抑制剂SB203580、100 nmol/Lc-Jun N末端激酶(JNK)信号通路抑制剂SP600125和150 nmol/L胞外信号调节激酶(ERK)信号通路抑制剂U0126预处理1h,再给予10 μg/mL rhHBcAg刺激48 h.之后收集细胞和细胞培养上清,实时定量PCR检测IL-15 mRNA水平,ELISA检测IL-15蛋白水平,Western Mot法检测PI3K/Akt和MAPK信号通路分子磷酸化水平.结果 与rhHBcAg未刺激组比较,rhHBcAg刺激组IL-15 mRNA和蛋白水平显著升高;与rhHBcAg刺激组比较,p38抑制剂预处理组IL-15水平明显降低,但PI3K/Akt、JNK和ERK抑制剂预处理组IL-15水平未见显著性改变.结论 rhHBcAg通过p38MAPK信号通路上调外周血mDC IL-15的分泌.
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IL-2或IL-15协同结核分枝杆菌抗原诱导人外周血单个核细胞体外扩增细胞的特性比较
目的 分析白细胞介素2(IL-2)或IL-15协同结核分枝杆菌抗原(MTB-Ag)诱导人外周血单个核细胞(PBMC)扩增细胞的生物学特性.方法 采用MTB-Ag联合IL-2或MTB-Ag联合IL-15体外分别刺激正常人PBMC,培养至第12天时,经流式细胞术检测扩增细胞中γδT细胞、自然杀伤(NK)细胞和CD4+T细胞所占的比例,以及分析3种淋巴细胞扩增的绝对数量.同时用MTT法检测两组扩增细胞对肿瘤细胞的杀伤活性.结果 与MTB-Ag联合IL-2刺激组相比,MTB-Ag联合IL-15刺激组扩增细胞中γδ T细胞所占比例明显高于前者,NK细胞所占比例明显低于前者;而两组扩增细胞中CD4+T细胞所占比例并无显著性差异.与2个刺激组中3种淋巴细胞数量的分析结果一致.并且MTB-Ag联合IL-15刺激组扩增细胞对不同肿瘤细胞均具有显著的杀伤活性,但与MTB-Ag联合IL-2刺激组相比,并无显著性差异.结论 IL-15协同MTB-Ag可高效诱导人PBMC产生以γδ T细胞增殖为主的效应细胞,该扩增细胞在体外对肿瘤细胞具有显著的杀伤活性.
