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hCAP文献资料
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hCAP基因真核表达载体的构建及蛋白的表达和定位
目的:构建hCAP真核表达载体并检测融合蛋白在细胞内的表达及定位.方法:提取工具细胞CV-1的mRNA,反转录为cDNA.PCR扩增hCAP基因的cDNA全长,并将其克隆至pEGFP-C1表达载体中.进一步将构建的重组载体进行酶切和测序鉴定,并转染到工具细胞COS-7中,提取细胞蛋白进行Western blot.后利用激光共聚焦显微镜观察pEGFP-hCAP在NIH3T3成纤维细胞内的定位.结果:hCAP基因cDNA全长克隆到了真核表达载体pEGFP-C1中,酶切鉴定片段为3 879 bp,测序证实成功.Western blot检测GFPhCAP融合蛋白表达,相对分子质量(Mr)约为169 000.pEGFP-hCAP在NIH3T3细胞中主要定位于细胞周边.结论:成功构建了真核表达载体pEGFP-hCAP,融合蛋白在NIH3T3细胞中主要定位于细胞周边.
关键词： hCAP Western blot 绿色荧光蛋白 质粒构建
