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促血液血管细胞生长素文献资料
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HAPO蛋白的可溶性表达、纯化及生物学活性测定
目的:为了得到可溶性表达的人促血液血管细胞生成素(HAPO)蛋白, 构建含HAPO基因片段的pET22b(+)表达载体, 获得纯化的HAPO蛋白并检测其生物学活性.方法:利用RT-PCR技术从人胎肝中获得HAPO cDNA片段, 并克隆至表达载体pET22b(+)中, 利用基因工程菌BL21(DE3)进行表达, 产物利用Ni~(2+)-螯合亲和层析及SP Sepharose FF柱层析分离纯化. 采用黏附实验检测HAPO对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)黏附性的影响.结果:从人胎肝中克隆出长为897 bp HAPO目的片段, 成功构建重组质粒pET22b(+)-HAPO, 其表达的融合蛋白以可溶状态存在, 表达量占菌体总蛋白的10%, 经分离纯化融合蛋白的纯度可达80%.活性测定结果表明HAPO以剂量依赖性方式增加HUVEC的总黏附性.结论:可溶性表达了HAPO蛋白, 并用体外实验证实HAPO对造血干/祖细胞归巢有一定促进作用.
关键词： 促血液血管细胞生长素 可溶性表达 分离纯化 人脐静脉内皮细胞
