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Th1/Th2细胞对再生障碍性贫血CD34+细胞体外扩增和集落形成的影响
目的:探讨Th1/Th2细胞平衡偏离及平衡回复对重型再生障碍性贫血(sAA)骨髓CD34+细胞体外扩增和集落生成的影响.方法:以1例确诊的sAA患者为研究对象.(1)分离骨髓单个核细胞,用免疫磁珠法富集CD34+细胞、CD4+(Th)细胞.(2)以流式细胞术(FCM)检测CD4+细胞中Th1、Th2细胞比例.(3)扩增CD34+细胞并再次富集以获足量CD34+细胞,分为4组:对照组;Th细胞作用组;Th细胞+IFN-γ作用组;Th细胞+IL-4作用组.(4)各组扩增培养10 d,继以集落生成试验,测定各组CD34+细胞扩增率和集落产率.(5)患者经免疫抑制治疗后随访,用FCM监测Th1/Th2细胞比.结果:(1)患者经5个月治疗获缓解.(2)缓解前、后Th1/Th2比分别是22.47和12.27,正常对照组为8.98±4.45.(3)CD34+细胞扩增率,以对照组高,其次为Th细胞+IL-4组、Th细胞组,Th细胞+IFN-γ组的低.(4)各组CD34+细胞集落产率与其扩增率数值平行相关,即对照组多,其次为Th细胞+IL-4组、Th细胞组,Th细胞+IFN-y组的少.结论:Th1细胞反应亢进直接抑制sAA患者CD34+细胞在体外的自我更新和增殖分化,IL-4能拮抗这种造血抑制效应,这可能是通过调节Th1/Th2平衡而间接实现的.
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人血管内皮生长因子165的基因克隆
目的:克隆人血管内皮生长因子165(hVEGF165)的cDNA序列,进而进行序列分析.方法:异硫氰酸胍一步法从人胎盘组织中提取总RNA,利用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)的方法扩增出hVEGF165 cDNA,与pGEM-T easy连接形成pGEM/hVEGF165重组质粒,双脱氧链终止法测定核苷酸序列.结果:通过DNA SIS软件将测序结果与已发表的hVEGF165序列(NM003376)比较,核苷酸序列完全一致.结论:获得了hVEGF165的cDNA基因,为下一步的研究工作奠定了基础.
关键词： 血管生成因子/生物合成 基因/分析 集落形成测定
