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大肠杆菌丝状热敏蛋白Z相互作用蛋白A (Ec-ZipA)文献资料
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大肠杆菌丝状热敏蛋白Z相互作用蛋白A(Ec-ZipA)原核表达、纯化与大鼠多克隆抗体的制备
目的 制备大肠杆菌丝状热敏蛋白Z相互作用蛋白A (Ec-ZipA)第185至328位氨基酸功能蛋白及其特异性大鼠多克隆抗体.方法 以基因合成法合成Ec-ZipA第185至328位氨基酸功能蛋白的基因序列,利用DNA重组技术与pET-30a(+)载体连接构建重组质粒.将重组质粒转化到E.coli BL21(DF3)中进行Ec-ZipA原核表达与表达优化.采用亲和层析方法分离纯化Ec-ZipA后,以荧光偏振(FP)实验进行生物学活性鉴定.以重组Ec-ZipA为抗原免疫大鼠制备多克隆抗体,采用ELISA和Western blot法检测抗体滴度和抗原特异性.结果 SDS-PAGE分析和Western blot实验证实大肠杆菌成功表达Ec-ZipA蛋白.FP实验表明纯化的Ec-ZipA具有良好的生物学活性.ELISA结果表明多克隆抗体具有较高的抗体滴度,效价可达1∶512 000.Western blot实验证实多克隆抗体具有良好的抗原特异性.结论 成功进行了Ec-ZipA原核表达、分离纯化并制备了大鼠抗Ec-ZipA多克隆抗体.
